1.2.2流式细胞仪检测EC周期分布：取生长良好的EC以细胞密度约5×107/孔传代于25cm2培养瓶内，待细胞贴壁后加入无血清RPMI-1640 培养液(SIGMA公司，美国)继续培养24小时。分三组进行如下实验：实验组加入10μg/m1的YH-16；阴性对照组加入含10%小牛血清RPMI-1640 培养液；空白对照组加入PBS液。继续培养24h后用胰酶消化制成单细胞悬液(1.0×105/ml)，离心沉淀，PBS漂洗，70%乙醇固定，4℃保存，送检。

    1.2.3实时荧光定量PCR检测VEGF在EC中的表达

    1.2.3.1 分组实验：取生长良好的ECV304常规传代以细胞密度约1.0×107/孔接种于6孔培养板中，每孔加入细胞悬液1ml，移入37℃、5%CO2孵箱培养24h。在细胞生长至铺满80%孔底后，实验组加入10μg/m1的YH-16；阴性对照组培养瓶中加入含10%小牛血清RPMI-1640 培养液；空白对照组培养瓶中加入PBS液。继续培养24h后提取RNA进行实时荧光定量PCR检测。

    1.2.3.2 EC中总RNA的提取：按TRizol总RNA提取试剂盒(Bio-Rad，USA)说明进行操作。

    1.2.3.3 RT反应：按照RT-PCR试剂盒(Bio-Rad ......