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编号:11728315
积雪草甙对兔耳增生性瘢痕TGF-β1mRNA表达的影响(2)
http://www.100md.com 2009年1月1日 《中国美容医学》 2009年第1期
积雪草甙对兔耳增生性瘢痕TGF-β1mRNA表达的影响
积雪草甙对兔耳增生性瘢痕TGF-β1mRNA表达的影响

     1.4 总RNA的提取:应用TRIzol试剂盒,方法按说明书进行。所提取的总RNA用紫外分光光度计定量,A260/A280值≥1.8的进入下一步实验。

    1.5 实时定量荧光PCR扩增:逆转录反应严格按照试剂盒操作说明进行;PCR扩增反应体系(20μl)含SYBRPremix ExTaqTM(10μl),PCRForwardPrimer(0.7μl),PCRReversePrimer(0.7μl),ROX Reference Dye II(0.4μl),dH2O(5.1μl),cDNA(2μl)。反应条件:90℃10s, 94℃5s,60℃45s,共40个循环。 TGF-β1 mRNA 的定量:采用相对定量法。以GAPDH为参照,利用Ct值计算TGF-β1 mRNA 的相对量。TGF-β1 mRNA/GAPDH用下述公式计算:2-△ct。

    1.6 统计学方法:采用SPSS11.5统计软件处理系统,组间差异采用t检验进行比较。P<0.05有统计学意义。

    2结果

    2.1 大体情况:空白对照组瘢痕块颜色较红,质地较硬,瘢痕高出皮肤平面,增生范围未超出原创缘;得宝松组和积雪草甙组瘢痕颜色淡,质软。如图1。

    2.2 病理结果:HE染色观察可见,空白对照组毛细血管增生明显,有大量成纤维细胞,核大、密集,排列不规则;积雪草甙组和得宝松组成纤维细胞数量较少,核较小,排列相对规则。如图2。

    2.3 荧光强度曲线:荧光PCR 仪在PCR 扩增过程中,会自动记录每一循环的荧光强度,故称实时荧光PCR ,在最佳实验条件、相同扩增效率的前提下,反应体系产生一定强度的荧光信号所需的扩增循环数与反应体系中的原始模板数成反比 ......
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