白藜芦醇对模拟日光照射所致皮肤急性光损伤的保护作用(2)
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1.2 试验材料:白藜芦醇+抗氧化剂、抗氧化剂、白藜芦醇、基质均由雅诗兰黛公司(美国纽约)提供。基质霜为保湿霜,不含防晒剂,SPF值<1。苏木素、0.5%伊红。
1.3 实验仪器:日光模拟器(GS2006 3.0E版,中国计量科学研究院,北京),氙灯光源,可发射出15倍太阳强度的模拟日光。窄波段反射分光光度计(Mexameter MX18),测量皮肤erythema index(EI)值,每个部位测三次,取平均值。
1.4 方法
1.4.1 试验开始前测定每位志愿者最小红斑量(minimal erythema dose,MED)[4]。
1.4.2 在志愿者背部6个部位进行如下操作:部位1～4分别涂抹白藜芦醇+抗氧化剂、抗氧化剂、白藜芦醇、基质半小时后予1.5倍MED的ssUVR,部位5仅予照射而不涂抹试验样品(阳性对照),部位6既不照射亦不涂抹试验样品(阴性对照)。详见表1。各照光部位每日照射1次,连续照射4天。
1.4.3 试验开始前和末次照射结束后测定EI值。
1.4.4 末次照射后24h对受试部位皮肤进行取材,行HE染色,用测微尺测量表皮厚度并进行日晒伤细胞计数。
1.5 数据处理:EI差值=末次照射后EI值-试验开始前EI值
1.6 统计学分析:采用16.0版SPSS软件包进行统计学分析。各组间数据比较采用方差分析。P<0.05认为具有统计学意义。
2结果
2.1 EI值:EI值反映皮肤的红斑程度。试验前6个部位EI值波动于184.15～200之间,差异无统计学意义(P>0.05)。研究结束时,5个照光部位EI值均显著升高:以部位4及部位5升高尤为显著,由治疗前的200及189.57分别升至419.21及432.09;而部位1升高最少,由治疗前的195.36升至335.42。部位1与部位4、5相比,EI差值的差异具有统计学意义(P<0.05)。详见图1。
2.2 表皮厚度:表皮厚度反映皮肤的水肿程度。连续照射4次后,所有照光部位的表皮不同程度增厚。以部位4、5增厚最为显著,而部位1、2、3表皮轻度增厚,与部位4、5相比具有统计学差异(P<0.05)。详见图2及图4。
2.3 日晒伤细胞:部位6为正常皮肤,无日晒伤细胞(胞核固缩,胞质粉染)。连续照射4次后,所有照光部位均有日晒伤细胞形成。部位4、5的日晒伤细胞最多,而部位1、2、3的日晒伤细胞相对较少,与部位4、5相比具有统计学差异(P<0.05)。详见图3及图4。
3讨论
白藜芦醇是植物界分布较广的羟基二苯乙烯类化合物,在新鲜葡萄皮中的含量最高[5]。唐桦等[6]研究发现,不同浓度的白藜芦醇对正常HaCaT细胞增殖无明显影响。白藜芦醇在体外对UAB 照射后的HaCaT细胞有保护作用,其机制可能与提高氧化酶活性、清除自由基有关。Afaq F等[7]表明白藜芦醇能抑制UVB诱导的皮肤炎症和水肿。
本研究观察了白藜芦醇对模拟日光照射诱导的皮肤急性光损伤的保护作用。研究结果显示各照光部位EI值均不同程度升高。由于EI值反映皮肤的红斑情况,可间接反映皮肤中血红素的含量,因而EI值可用于皮肤颜色的定量分析。EI越大则皮肤越红。经模拟日光照射后,未抹任检测何物质的阳性对照部位及仅涂抹基质的照光部位出现了明显的红斑,EI值显著升高,提示光照诱发皮肤显著变红。单独涂抹抗氧化剂或白藜芦醇部位红斑较轻, EI 值上升幅度均较上述部位轻,提示上述两种物质分别可一定程度地减轻ssUVR引起的皮肤红斑;白藜芦醇和抗氧化剂联合外涂部位红斑最轻,EI值升高程度显著低于其它照光部位,提示白藜芦醇联合抗氧化剂能有效地保护急性ssUVR引起的皮肤红斑。
紫外线照射后,皮肤的最初反应为血管扩张,表现为皮肤红斑和水肿[8]。表皮厚度可以反应皮肤的水肿程度。Roy等[9]发现用2倍最小红斑量的模拟日光照射皮肤,可引起皮肤厚度增加。本研究的病理结果显示,在所有照光部位表皮均不同程度增厚,其中阳性对照部位和仅涂抹基质部位表皮增厚最为显著,而涂抹白藜芦醇联合抗氧化剂和仅单独涂抹白藜芦醇或抗氧化剂的部位表皮轻微增厚,提示联合外用白藜芦醇和抗氧化剂或单独外用二者之一均能有效地保护模拟日光照射诱发的表皮水肿。
紫外线照射能增加氧自由基的生成,而氧自由基能引起DNA损伤,角质形成细胞凋亡。日晒伤细胞是典型的凋亡的角质形成细胞,表现为胞核固缩,胞质嗜酸性[10]。研究表明紫外线照射的最严重后果是表皮中日晒伤细胞形成[11]。本研究结果显示,经过1.5最小红斑量的模拟日光连续照射4次后,各照光部位均有不同数量的日晒伤细胞形成,其中阳性对照部位和仅涂抹基质部位日晒伤细胞数量最多,而涂抹白藜芦醇联合抗氧化剂和仅单独涂抹白藜芦醇或抗氧化剂的部位日晒伤细胞数量相对较少,提示联合外用白藜芦醇和抗氧化剂或单独外用二者之一均能有效地保护模拟日光照射诱导的日晒伤细胞形成。
4结论
单独外用白藜芦醇或抗氧化剂对模拟日光照射引起的急性的光损伤具有一定保护作用,当二者联合外用时保护作用更强。
[参考文献]
[1]Afaq F,Mukhtar H. Botanical antioxidants in the prevention of photocarcinogenesis and photoaging[J]. Exp Dermatol,2006,15:678-684.
[2]Mohammad Athar,Jung Ho Back,Xiuwei Tang,et al. Resveratrol: A review of pre-clinical studies for human cancer prevention[J]. Toxicol Appl Pharmacol,2007 November 1,224(3):274-283.
[3]Fitzpatrick TB. The validity and practicality of sun-reactive skin types Ⅰ through Ⅵ[J]. Arch Dermatol,1988,124:869-871.
[4]Farr PM,Diffey BL. Quantitative studies on cutaneous erythema induced by ultraviolet radiation[J] ......
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