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编号:12095970
人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达(2)
http://www.100md.com 2011年4月1日 《中国美容医学》 2011年第4期
     1.4 hBMSCs的鉴定

    1.4.1 hBMSCs的细胞周期检测:取2代hBMSCs经过0.25%胰酶消化离心(1 000r/5min),细胞计数并重悬,然后调整细胞浓度至1×106/ml,用70%的酒精固定24h,用NRaseA处理30min,碘化丙啶(Pl)染色10min。流式细胞仪检测并分析分析细胞周期。

    1.4.2 hBMSCs的表面抗原表达检测:取2代hBMSCs经过0.25%胰酶消化离心(1 000r/5min),细胞计数并重悬,然后调整细胞浓度至1×106/ml,按Bioscience抗体说明书操作标记CD34-PE、CD44-PE、CD90-FITC、CD45-FITC,用Accuri C6流式细胞仪检测表面标志物的表达,利用小鼠FITC IgG1-Is otype,PE IgG1 -Isotype 和空白作为对照。

    1.4.3 hBMSCs的多向诱导分化:①成脂诱导:取2代hBMS Cs,以1×104cells/cm2接种到6孔板中,每孔加入2ml成脂诱导培养基[10-11](0.5μM氢化可的松, 0.5μM IBMX,60μM 消炎痛,10μg/ml 胰岛素);诱导10天后,钙-福尔马林固定细胞,0.1mol/L的PBS轻洗3遍 ......
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