黑布药膏对兔耳增生性瘢痕Bax和Bcl-2 mRAN表达的影响(2)
 |
| 第1页 |
参见附件(1921KB，3页)。
2.2实时定量PCR检测Bax、Bcl-2mRNA表达：①抽提总RNA参照Trizol说明书采取一步法提取总RNA, 紫外分析及电泳测总RNA的纯度、浓度及完整性；②逆转录合成cDNA按照反转录反应试剂盒操作方法操作，反应条件：37℃，15min，85℃，5s；③PCR扩增应用ABI 7500 扩增仪。反应条件： 95℃，30s(1个循环)。95℃，5s；60℃，34s(40个循环)；95℃，15s；60℃，1min；95℃，15s(1个循环)；④PCR反应设置检测文件，反应结束后，使用Sequence Detection software version 1.2.3软件(Applied Bisystems公司)分析PCR过程每个检测样本的cT(Threshold cycle)值，得出Ct值，按公式2-△△Ct求出基因表达的相对变化量[4]，然后进行各组间比较。
2.3 统计学处理：采用SPSS13.0进行数据处理，数据以x±s表示，组间比较用t检验，P<0.05为差异有显著意义。
3结果
3.1大体观察：在兔耳腹侧面形成创面后，伤口约13～15天后愈合，愈合过程中上皮化时即能触到硬块，此硬块不断高于皮面，淡红色，增生范围不超过原创沿，19～22天时增生到最高峰，厚度约为兔耳腹面皮肤厚度的3倍左右。而且随时间推移，模型组变化不大，一直处于增生状态(见图1～4)。黑布药膏治疗组随着给药时间的延长，瘢痕开始逐渐软化，体积逐渐缩小，趋于平复，色变淡(见图5～8)。
3.2 BaxmRNA检测结果：与正常组比较，模型组BaxmRNA表达降低(P<0.05)，并且随着上皮化时间越长，降低愈明显，从上皮化第六周开始，与正常组相比差异更加显著 (P<0.01)。治疗组BaxmRNA表达较模型组明显增加，相比有显著性差异(P<0.01)，并且随着上皮化时间越长，增加愈明显，见表1。
3.3 Bcl-2mRNA检测结果：与正常组比较，模型组Bcl-2 mRNA表达增加(P<0.01)，并且随着上皮化时间越长，增加愈明显。治疗组Bcl-2mRNA表达较模型组明显降低，相比有显著性差异(P<0.01)，并且随着上皮化时间越长，降低愈明显，见表2。
4讨论
4.1 增生性瘢痕是组织创伤后过度修复的一种反应，表现为成纤维细胞的大量增殖和胶原等间质蛋白的沉积。中医理论认为，瘢痕多为风火气郁，痰湿凝聚，气滞血瘀，余毒搏于肌肤所致。黑布药膏是赵炳南的经验方，其组成为：老黑醋250g，五倍子100g，蜈蚣1.2g，蜂蜜100g。方中老黑醋软坚解毒，五倍子收敛解毒，蜈蚣破瘀解毒，蜂蜜调和诸药，共奏破瘀软坚之功效。
4.2 在增生性瘢痕发生过程中，瘢痕组成细胞能分泌多种生长因子，这些生长因子一方面通过自分泌或旁分泌方式，直接促进表皮细胞、内皮细胞和成纤维细胞增殖，在引起肉芽组织过度增生的同时，刺激胶原、纤维粘连蛋白和聚葡萄糖胺等细胞外基质的大量合成和分泌；另一方面，这些细胞因子还能抑制修复细胞趋向凋亡[5]。说明增生性瘢痕的发生可能与修复细胞的凋亡减少相关。细胞凋亡(apoptosis)是机体在生长发育过程中和受到外来刺激时清除富余、衰老或受伤的细胞，以保持机体内环境平衡的一种自我调节机制[6]。细胞凋亡可能由凋亡相关基因编码的蛋白调节所控制，是多种促进因素和抑制因素共同作用的结果。Bcl-2家族成员是细胞凋亡过程中的一类调节因子，该基因家族包括两类功能相反的基因，一类是抑制细胞凋亡的基因如Bcl-2基因，另一类是促进细胞凋亡的基因如Bax等基因。Bax基因与Bcl-2基因在组织中广泛表达，当外界信号引起细胞凋亡时，bax与线粒体膜相结合，两个bax蛋白相互聚合形成同二聚体，促进细胞凋亡。当Bcl-2基因转录增强，蛋白含量升高时，Bcl-2与Bax形成比Bax-bax更稳定的异二聚体，从而抑制bax促细胞凋亡的作用[7]。
4.3 本研究结果显示，在增生性瘢痕中，bax基因表达明显低于正常皮肤，而bcl-2基因表达显著增强，这说明增生性瘢痕与bax和bcl-2基因表达变化密切相关，凋亡受阻可能是增生性瘢痕形成的原因之一。经黑布药膏治疗后，bax基因表达明显高于模型组，bcl-2基因表达明显低于模型组，说明黑布药膏通过降低 Bcl-2mRNA的表达，增加Bax mRNA表达，从而促进成纤维细胞凋亡，抑制成纤维细胞增殖，使瘢痕消退，这可能是黑布药膏治疗增生性瘢痕的机制之一，为临床应用黑布药膏治疗增生性瘢痕提供了实验依据。
[参考文献]
[1]Desmouliere A,Redard M,Darby I,et a1.Apoptosis mediate the decrease in cellularity during the transition between granulation tissue and scar[J].Am J Pathol,1995,146(1):56-57.
[2]Park JP,Hockenbery DM ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(1921KB，3页)。