男性型脱发患者头皮雄激素受体表达的研究(2)
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参见附件。
1.1.4 受试者取材部位选择及方法：AGA患者头皮分枕部非脱发区、脱发过渡区、脱发区(图1)三个区域,每个区域用同一钻孔刀(slot pouch φ3mm，Micro-Tools Europe,Germa ny)各取3块的头皮组织，每块大小约3mm×3mm×5mm。对照组取与脱发区相对应部位的头皮。并对取出的标本进行预处理，把头皮组织分离成只含1～2根毛发的小组织。
1.1.5 实验分组：分正常对照组、AGA枕部非脱发区组、AGA脱发过渡区组及AGA脱发区组。
1.2 实验方法
1.2.1主要试剂和仪器：AR单克隆抗体(Santa Cruz，USA)，生物素二抗、DAB(上海长岛公司)，普通光学显微镜(Olympus 81i，Japan)。
1.2.2 AR表达的检测和结果判断
1.2.2.1 AR表达的检测：对预先处理的毛囊组织进行3μm连续切片，切片时以毛囊纵轴为方向。按照试剂盒操作说明对切片进行免疫组织化学染色，对各组毛囊AR表达强度进行观察。
1.2.2.2 AR表达的结果判断：每张切片用Olympus显微镜在图像分析系统下计数。AR免疫组化阳性结果判定：细胞核出现棕黄色染色。参照Garcia[3]等的判断方法确定雄激素受体表达的半定量分级：①细胞浅棕黄色着色为l，深棕黄色为2；②阳性着色细胞比例0～25%为l，阳性着色细胞比例26%～50%为2，阳性着色细胞比例51%～75%为3，阳性着色细胞比例76%～100%为4。各类着色细胞的强度乘以比例的分值等于1～2为(±)，3～4为(+)，5～6为(++)，>6为(+++)。
1.3 统计学分析：每个AGA患者和正常对照观察5个毛囊,每张片子分别取5个高倍视野，读取平均数作为该标本半定量等级。分别计数四组标本阳性各等级的例数。利用SPSS13.0软件包，用非参数统计方法Kruskal-Wallis秩和检验，检验水准a=0.05。秩和检验结果有统计学意义，再选择Wilcoxon进行两两比较，P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 头皮不同部位AR的表达：各组毛囊、皮脂腺和表皮均表达AR(见图2～5)。在毛囊隆突部和毛囊漏斗部，男性AGA患者的交界区及脱发区的AR的表达强于枕部及正常对照组(P<0.05)；在表皮，AR表达强度，男性AGA患者不同区域差异不大(P>0.05)，但均强于正常对照组(P<0.05)；在皮脂腺，各组的AR表达强度差异不大(P>0.05)。
2.2 AGA患者头皮不同部位总的AR的表达：AGA患者不同部位总的AR受体表达之间比较，均有明显差异(P<0.05),从强到弱依次为：脱发区→脱发交界区→非脱发区枕部；AGA患者与正常对照组相比，AR表达明显强于正常人,均有显著性差异(P<0.05)，详见表2。
3 讨论
3.1 雄激素对毛发的生长有极其重要的影响，这种影响是有部位的差异；在青春期显著刺激第二性征毛发的生长，如胡须、腋毛及会阴部毛发，但对于AGA患者，使特定部位的头顶和前额部头发逐渐向毳毛转化而形成脱发，特定部位的脱发可能与脱发区高水平的AR表达有关[2,4-5]。
3.2 本研究结果支持了这一观点。笔者发现男性AGA患者脱发区AR表达强度要明显强于非脱发区枕部，这一点与国外Sawaya等[4]和国内陈修漾等[5]报道基本一致；此外，笔者还发现，在脱发交界区，AR表达要强于非脱发区，低于脱发区，并且男性AGA患者不同区域AR表达均强于正常对照组。这进一步说明，GAA患者的特定区域AR表达异常可能在AGA脱发过程中起着重要的作用，由于AR表达异常，可与组织和/(或)血清中雄激素结合，即使在组织或血清中雄激素浓度正常情况下，仍可诱导具有生物活性的介质过渡释放，如TGF-β，TGFF-β过渡产生被认为在AGA发病过程中起一关键的作用[6]。
3.3 本研究结果表明，仅患者不同区域表皮的AR表达与正常人有明显区别外，患者各部位之间表皮和皮脂腺AR表达以及与对照组皮脂腺AR表达并无明显区别，这一点与国内陈修漾等[5]报道有所区别，至于其原因尚不清楚，可能与病例严重程度、样本大小等不同有关。
3.4 在本研究中笔者惊奇地发现，AGA患者毛囊隆突部和毛囊漏斗部中AR表达在不同区域均有明显区别，AR表达强度依次是脱发区、脱发交界区、非脱发区和正常人，这一点国内外均未见报道。至于其原因和在AGA患者发病过程中的作用目前尚不清楚，笔者认为毛囊隆突部和漏斗部与真皮乳头一样，在AGA发病过程中可能起着重要的作用，均可通过与雄激素结合而产生过多的生物活性物质,如TGF- β而影响毛发的生长[7-8]。有研究报道[9],引起AGA脱发的是具有分化为毛囊能力的CD-200和CD-34阳性的毛囊干细胞数量减少；毛囊干细胞位于毛囊隆突部，毛囊干细胞具有向毛囊、表皮和皮脂腺分化的能力[10]。因此，笔者推测毛囊隆突部AR表达异常可能在AGA发病过程中起更重要作用，与雄激素结合后，释放的生物活性物质可能影响毛囊隆突部毛囊干细胞向毛囊的分化和(或)毛囊干细胞生存的微环境而迁移出隆突部而引起脱发。是否如此，值得进一步研究证实。
[参考文献]
[1]雷鸣,范金财.雄源遗传性脱发的病因研究及相关治疗进展[J].中国美容医学,2008,12:1812-1815.
[2]Hibberts NA,Howell AE,Randall VA.Balding hair follicle dermal papilla cells contain higher levels of androgen receptors than those from non-balding scalp [J].J Endocrinol,1998,156(1):59-65.
[3]Garcia RL,Coltrera MD,Gown AM.Analysis of proliferative grade using anti-PCNA/cyclin monoclonal antibodies in fixed, embedded tissues.Comparison with flow cytometric analysis[J].Am J Pathol,1989,134:733-739.
[4]Sawaya ME,Price VH .Different levels of 5alpha-reductase type I and II, aromatase, and androgen receptor in hair follicles of women and men with androgenetic alopecia[J] ......
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