人外周血内皮祖细胞的分离、培养、扩增和鉴定(2)
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实验中笔者还发现，不同培养时间的EPCs形态差别较大，单靠形态难以鉴定EPCs。目前，EPCs的鉴定仍然要通过表面标志物检测，常以CD34、CD133、血管内皮生长因子受体2和Ⅷ因子作为识别EPCs的重要表型特征，具备上述表型特征的细胞方被认为是EPCs[6]。CD34是造血干细胞的重要标志，在胚胎早期血管就有表达，外周血中分离出的CD34阳性细胞在体外能够向内皮细胞分化在体内能够参与新生血管形成，因此常被用作识别EPCs的重要标志[7]。近年，更多研究表明，CD133能表达于EPCs上，是一种比CD34更有价值的EPCs表面标志，而且CD133在EPCs的分化过程中迅速下调，但在成熟内皮细胞则无表达，这使越来越多的学者乐于采用CD133来分离EPCs，并成为排除成熟内皮细胞的EPCs的细胞标记，进而成为分离EPCs的最常用细胞表面标志[8]。
本研究中，笔者采用设立阴性对照的方法，对培养第7天的贴壁细胞进行免疫组化检测。结果显示，培养细胞的CD34、CD133、VEGFR-2和Ⅷ因子的几项检测指标在对照组为阴性，在试验组均呈阳性，表明笔者培养的细胞为EPCs。
综上所述，本研究初步建立了一种人外周血EPCs的分离、培养方法，可避免人外周血EPCs较少，提取大量细胞困难的缺点，为后续实验研究提供充足的EPCs。
[参考文献]
[1]Singh AK，Gudehithlu KP，Patri S，et al.Impaired integration of endothelial progenitor cells in capillaries of diabetic wounds is reversible with vascular endothelial growth factor infusion[J]. Trans Res，2007，149 (5)：282-291.
[2]Chen ZZ，Jiang XD， Zhang LL，et al.Beneficial effect of autologous transplantation of bone m arrow stromal cells and endothelial progenitor cells on cerebral ischemia in rabbits[J].Neurosci Lett，2008，445(1)：36-41.
[3]Zhu C，Ying D，Mi J，et al.Development of anti-atherosclerotic tissue-engineered blood vessel by A20-regulated endothelial progenitor cells seeding decellularized vascular matrix. Biomaterials[J].Biomaterials，2008，29(17)：2628-2636.
[4]Asahara T，Mumhara T，Suilivan A，et al.Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesi[J] ......
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