不同合金烤瓷冠修复后龈下菌斑中牙龈卟啉单胞菌的变化(2)

http://www.100md.com 2015年8月1日 中国美容医学2015年第15期

     1.2.4 引物：根据相关文献设计引物[4]及细菌通用引物[5]，引物均由上海生工生物工程股份有限公司合成。

    1.3 方法

    1.3.1 牙周临床指标检测：分别在基牙修复前、修复后1个月和修复后3个月检查牙周临床指标，由同一名医生完成临床操作并且记录龈沟出血指数(SBI)。SBI根据《牙周病学》第2版描述的方法进行检测[6]。

    1.3.2 临床样本采集：牙体预备前嘱患者清水漱口1分钟。采集部位以棉卷隔湿，使用无菌龈下刮治器取基牙舌侧的龈下菌斑，立即置入含1mlPBS的EP管内，冰浴下转送实验室并于-20℃冰箱内冻存备用。

    1.3.3标准菌株：牙龈卟啉单胞菌ATCC3327737℃厌氧复苏48h，各自挑选1个单菌落行次代培养(牛心脑液培养基)，厌氧条件下(37℃，24h)用生理盐水分别洗菌，用于DNA提取。

    1.3.4 DNA的制备：牙龈卟啉单胞菌的DNA提取方法均参照细菌基因组DNA提取试剂盒的操作步骤进行。-20℃保存备用。

    1.3.5 标准品的制备：将提取备用的牙龈卟啉单胞菌DNA用无菌水连续5倍稀释，共稀释7个梯度，即：101，10-1，10-2，10-3，10-4，10-5，10-6 ......