新生儿脐血IL-4,IL-13,IFN-γ,TGF-β测定及其意义(2)
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2010年2月1日
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参见附件(1554KB，2页)。
1.2.2 操作步骤:收集脐血10ml,以3500r/min离心,取上清液置-20℃保存。配置不同浓度的标准品、生物素化抗体工作液、酶结合物工作液,预实验测定标准品OD-450值。将标准品、样品分别加样于96孔板。密封后孵育规定时间,洗板4次,除空白孔外加入生物素化抗体工作液。密封后孵育规定时间,洗板4次,除空白孔外加入酶结合物工作液。密封后孵育规定时间,洗板4次,加入显色剂,避光孵育规定时间,加入终止液混匀后测OD-450值(5分钟内)。EXCEL2007制作标准曲线,将OD-450值转换为浓度。
1.2.3 统计学处理:所有数据通过spss17.0软件完成t检验和卡方分析,检验水准以P<0.05为差异有显著性意义。
2 结果
2.1 性别、吸烟史、母亲孕期回避特殊饮食、过敏性疾病家族史对脐血IL-4,IL-13,IFN-γ,TGF-β的影响。男性、女性,父母有无吸烟史,母亲孕期是否回避特殊饮食并不影响脐血IL-4,IL-13,IFN-γ,TGF-β的含量;有过敏性疾病家族史的新生儿,脐血IL-13含量高于对照组(P<0.01),TGF-β含量低于对照组(P <0.01),IL-4、IFN-γ含量与对照组差别无统计学意义,见表1。
2.2 发生湿疹婴儿与未发生湿疹婴儿脐血IL-4,IL-13,IFN-γ,TGF-β测定值比较。湿疹患儿IL-13含量高于未患湿疹患儿,TGF-β含量低于为患湿疹患儿,IL-4、IFN-γ含量与未患湿疹患儿差别无统计学意义,见表2。
2.3 性别、吸烟史、母亲孕期回避特殊饮食、过敏性疾病家族史对婴幼儿发生湿疹的影响。男性、女性,父母有无吸烟史,母亲孕期是否回避特殊饮食其发生湿疹比例差别无统计学意义;有过敏性疾病家族史的婴儿发生湿疹的比例明显高于无过敏性疾病家族史的婴儿,见表3。
3 讨论
随着过敏性疾病的发病率的升高,婴幼儿过敏性疾病的干预越来越引起家庭和社会的关注和重视。婴幼儿过敏性疾病的干预可分为一级预防即消除过敏性疾病发生的高危因素,二级预防即过敏性疾病发生后尽早诊断和治疗,三级预防即将过敏性疾病的发生降低到最低限度[3]。湿疹是婴幼儿期过敏性疾病比较早期的表现,要做到一级预防,就要找出湿疹发生的高危因素。本次试验结果发现,性别、家族有无吸烟史、母亲孕期回避特殊饮食对婴幼儿发生湿疹的影响并不大,与国外最新报道基本一致。Du Toit G, Katz Y等对以色列学龄5171名在英国生活的儿童(母亲孕期避免花生暴露),5615名在以色列生活(母亲孕期没有避免花生暴露)的儿童做了比较,发现前者花生过敏发生率1.85%,后者仅为017%,结果有统计学意义。排除特应质的影响后,两个国家发生花生过敏的校正危险比是9.8,也就是母亲孕期避免花生暴露的儿童花生过敏发病率是母亲孕期没有避免花生暴露儿童的10倍[4]。2008年AAP也指出目前,仍缺乏证据证明孕期饮食限制对特应性疾病具有重要的预防作用[5]。
胎儿在妊娠22周时已出现针对吸入性和食物过敏原的细胞免疫反应,胎儿的宫内环境对儿童时期免疫反应形成的初始化过程以及与日后的过敏性疾病(支气管哮喘、过敏性鼻炎、湿疹或异位性皮炎、过敏性眼结膜炎等)的发生具有重要影响[6]。IL-4,IL-13作为B细胞生长刺激因子,可以刺激IgE的产生,上调单个核细胞表面MHCII 表达,扩增Th2亚群;IFN-γ阻止IL-4,IL-13介导IgE的产生[7]。已经发现哮喘患儿外周血和支气管肺泡灌洗液中的T淋巴细胞会表达IL-4mRNA。哮喘患儿外周血分离的单个核细胞经PHA刺激释放的IL-4的量明显高于正常儿童[8]。而代表Th1的IFN-γ在哮喘患儿中的含量明显低于正常儿童。但从我们的试验发现过敏性疾病家族史婴幼儿脐血中IL-4的含量很低,与对照组的差别不明显,IFN-γ的含量虽然较对照组低,但差别也无统计学意义,与Hagendorens MM结果相似[9]。许以平等在脐血中分离单个核细胞经PHA刺激所分泌的IL-4的量很低,与正常组差别无统计学意义,表明脐血中的Th2功能并无想象的亢进[10],或者在新生儿期可能存在更能反映Th2功能的细胞因子[11]。本试验过敏性疾病家族史的婴幼儿IL-13的含量明显高于对照组,6个月之内发生湿疹的婴幼儿IL-13的含量明显高于对照组。这说明IL-13可能更能代表遗传表型,这可能与脐血中CD4+IL13+淋巴细胞有关[12],因此IL-13也可能成为预测过敏性疾病发生的新指标。调节性T淋巴细胞(Tr)参与过敏性的发病,Tr有不同的亚群,它们所分泌的IL-10、转化生长因子TGF-β、细胞毒T淋巴细胞相关抗原(CTLA)-4可使T淋巴细胞对过敏原不发生反应,此即所谓T细胞无能[13]。过敏性家族史的婴幼儿TGF-β含量低于对照组,提示特应质儿童体内的拮抗淋巴细胞应答的能力较正常儿童弱,TGF-β能阻止IL-1基因等的表达,从而抑制Th2反应。脐血细胞因子水平反应的是出生之前环境对新生儿炎性因子和抗炎因子的影响[14],高IL-13的水平提示新生儿在出生前就被母体的抗原致敏,当出生后接触环境抗原后,因为免疫不耐受,更加容易发生过敏性疾病[15]。
本研究提示,有家族过敏史的新生儿其代表Th2细胞功能水平的细胞因子IL-13产生明显增高,并具过敏症如湿疹的发生倾向。因而对此类新生儿有必要避免变应原刺激,及早采取防治措施,以减少变态反应性疾病的发生。
参考文献
[1] 林荣军,王为达,潘玉娟,等.青岛市区0-14岁儿童哮喘流行病学调查[J]. 青岛大学医学院学报,2002,38(3):202-205
[2] Del Giudice MM, Rocco A, Capristo C.Probiotics in the atopic march: highlights and new insights [J] ......
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