Bmi-1 shRNA抑制膀胱癌EJ细胞侵袭和转移的实验研究(2)
参见附件(12kb)。
2 结果
2.1 细胞划痕实验检测Bmi-1 shRNA对膀胱癌EJ细胞迁移能力的影响：划痕48h后未转染组和空质粒对照组两侧细胞大部分已经接近融合，而实验组48 h后融合趋势仍不明显(图1)。
2.2 Transwell小室检测Bmi-1 shRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭能力的影响：实验组细胞的穿膜细胞数为(77.0 ±4.8)个。未转染组细胞的穿膜细胞数为(152.1±4.3)个。空质粒组细胞的穿膜细胞数为(155.0 ±6.5)个(图2)。实验组与其他两组比较差异均有统计学意义(p<0.01)，未转染组与空质粒对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 Bmi-1 shRNA对MMP-2 mRNA表达的影响：RT-PCR结果显示，与不加TGF-β组相比，TGF-β作用后，未转染组和空质粒对照组中MMP-2表达明显升高，而Bmi-1 shRNA实验组MMP-2表达没有变化(图3)。
2.4 Bmi-1 shRNA对E-Cadherin和α-SMA表达的影响：Western结果显示，与不加TGF-β组相比，TGF-β作用后，未转染组和空质粒对照组中E-Cadherin表达明显降低，而Bmi-1 shRNA实验组E-Cadherin表达没有变化；空白组和对照组中α-SMA表达明显升高，而Bmi-1 shRNA实验组α-SMA表达没有变化(图4)。
3 讨论
原癌基因Bmi-1在人类的多种肿瘤中异常表达，并与多种肿瘤发生相关。在前期研究中，我们发现当膀胱癌细胞中Bmi-1蛋白质的表达受到抑制后，膀胱癌5637细胞的增殖受到抑制，同时细胞凋亡明显增加[1]。为进一步探讨Bmi-1基因在膀胱癌发生、发展中的作用，我们构建了Bmi-1 shRNA质粒，以此观察Bmi-1基因对膀胱癌侵袭和转移的影响。
我们应用Transwell侵袭实验和细胞划痕实验发现，转染Bmi-1 shRNA质粒后，膀胱癌EJ细胞的侵袭和转移能力都明显降低。因此，说明Bmi-1基因本身可以促进膀胱肿瘤细胞的侵袭和转移[2]。另外，基质金属蛋白酶能够降解细胞外基质，并能够通过降解Ⅳ型胶原来降解基底膜，而基底膜的降解是肿瘤浸润和转移的关键步骤[3]。TGF-β细胞因子在肿瘤细胞中可诱导表达血管内皮生长因子、金属蛋白酶MMP 2和MMP 9等，有利于肿瘤细胞的浸润和转移[4]。本次研究发现当膀胱癌EJ细胞中的Bmi-1基因表达降低时，可以阻断TGF-β这种上调MMP2表达作用 ......
2 结果
2.1 细胞划痕实验检测Bmi-1 shRNA对膀胱癌EJ细胞迁移能力的影响：划痕48h后未转染组和空质粒对照组两侧细胞大部分已经接近融合，而实验组48 h后融合趋势仍不明显(图1)。
2.2 Transwell小室检测Bmi-1 shRNA对膀胱癌EJ细胞侵袭能力的影响：实验组细胞的穿膜细胞数为(77.0 ±4.8)个。未转染组细胞的穿膜细胞数为(152.1±4.3)个。空质粒组细胞的穿膜细胞数为(155.0 ±6.5)个(图2)。实验组与其他两组比较差异均有统计学意义(p<0.01)，未转染组与空质粒对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。
2.3 Bmi-1 shRNA对MMP-2 mRNA表达的影响：RT-PCR结果显示，与不加TGF-β组相比，TGF-β作用后，未转染组和空质粒对照组中MMP-2表达明显升高，而Bmi-1 shRNA实验组MMP-2表达没有变化(图3)。
2.4 Bmi-1 shRNA对E-Cadherin和α-SMA表达的影响：Western结果显示，与不加TGF-β组相比，TGF-β作用后，未转染组和空质粒对照组中E-Cadherin表达明显降低，而Bmi-1 shRNA实验组E-Cadherin表达没有变化；空白组和对照组中α-SMA表达明显升高，而Bmi-1 shRNA实验组α-SMA表达没有变化(图4)。
3 讨论
原癌基因Bmi-1在人类的多种肿瘤中异常表达，并与多种肿瘤发生相关。在前期研究中，我们发现当膀胱癌细胞中Bmi-1蛋白质的表达受到抑制后，膀胱癌5637细胞的增殖受到抑制，同时细胞凋亡明显增加[1]。为进一步探讨Bmi-1基因在膀胱癌发生、发展中的作用，我们构建了Bmi-1 shRNA质粒，以此观察Bmi-1基因对膀胱癌侵袭和转移的影响。
我们应用Transwell侵袭实验和细胞划痕实验发现，转染Bmi-1 shRNA质粒后，膀胱癌EJ细胞的侵袭和转移能力都明显降低。因此，说明Bmi-1基因本身可以促进膀胱肿瘤细胞的侵袭和转移[2]。另外，基质金属蛋白酶能够降解细胞外基质，并能够通过降解Ⅳ型胶原来降解基底膜，而基底膜的降解是肿瘤浸润和转移的关键步骤[3]。TGF-β细胞因子在肿瘤细胞中可诱导表达血管内皮生长因子、金属蛋白酶MMP 2和MMP 9等，有利于肿瘤细胞的浸润和转移[4]。本次研究发现当膀胱癌EJ细胞中的Bmi-1基因表达降低时，可以阻断TGF-β这种上调MMP2表达作用 ......
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