乙酰肝素酶和血管内皮生长因子在原发性膜性肾病患者肾小球内的表达及意义(2)
参见附件(12kb)。
1 对象与方法
1.1 一般资料:病例来源于2005年11月至2007年8月间在本院肾内科病房诊治的36例原发性膜性肾病患者，所有患者均为首次经临床和病理确诊者。6例正常对照肾组织来自因肾脏良性肿瘤行一侧肾脏切除术患者，肾组织标本取自上述患者远离病灶周围的正常肾组织。
1.1.1 入选标准：肾组织所取标本经MASSON及MASSOM+PASM染色，在光镜下可见肾小球上皮下嗜复红蛋白沉积，肾小球基底膜弥漫均匀增厚、空泡变、或钉突形成、或链环样改变，且免疫荧光可见IgG、C3沿肾小球基底膜沉积的IMN患者。
1.1.2 排除标准：除外结缔组织病、肝炎病毒或慢性肝炎、恶性实体肿瘤相关性MN患者及肾穿刺活检前曾服用过皮质类固醇激素、细胞毒药物、他汀类降脂药物、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)及血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)类药物的IMN患者。
1.2 分组方法
1.2.1 实验组(IMN组)：36例IMN，男21例，女15例，平均年龄43岁。IMN组根据病理改变分期再分为两个亚组，其中I期IMN组30例，男18例，女12例，平均年龄45岁;II期IMN组6例,男3例,女3例,平均年龄33岁。
1.2.2 对照组：6例因肾脏良性肿瘤行一侧肾切除术患者，肾组织标本取自上述患者远离病灶周围的正常肾组织。男5例，女1例，平均年龄岁46岁。
1.3 临床观察指标:血清肌酐、白蛋白、24小时尿蛋白定量。
1.4 免疫组化检查:按SP法进行。肾组织切片3um，常规脱蜡、水化，3% H2O2室温下孵育。0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)中行高压抗原修复。10%正常山羊血清封闭。一抗分别为兔抗人乙酰肝素酶单克隆抗体(稀释1∶75购自武汉博士德试剂公司)；兔抗人血管内皮生长因子单克隆抗体(稀释1∶300)，37℃孵育。生物素标记山羊抗兔、大鼠、小鼠和豚鼠IgG37℃孵育。辣根酶标记链酶卵白素工作液37℃孵育。DAB显色。苏木素复染。以PBS替代一抗作为阴性对照。
1.5 免疫组化结果判定:在胞浆或胞膜处有棕黄色或棕红色颗粒状物质沉积为阳性细胞。不着色为阴性。采用北航病理图像分析系统，通过光学显微镜放大400倍摄取图像，输入图像分析系统内，对图像进行灰度变换，使阳性面积与背景分开，进行自动测量。肾小球Hpa、VEGF免疫组化阳性面积测定：在光学显微镜计算机图像分析系统屏幕上，每例标本400倍镜下随机观察5个肾小球，分别计算每个指标的阳性面积与整个肾小球面积的比值，取其平均值作为每例标本每个指标肾小球阳性面积的比值。
1.6 统计学方法:统计学分析均采用SPSS11.0计算机软件包处理，计量资料采用均数±标准差表示，样本均数间比较采用t检验，组间比较采用方差分析，各参数间的相关性分析采用pearson 相关分析。 p<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 临床指标(表1)
表1 各组患者尿蛋白及血肌酐含量
ALB:albumin; Scr:serum creatinine; Upro:urinary protein
2.2 免疫组化
2.2.1 Hpa表达情况:Hpa在对照组正常肾组织的肾小球基底膜、肾小球足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞有少量表达。Hpa在IMN患者肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有表达。IMN I期组及II期组与对照组比较，肾小球内Hpa表达明显增强(p<0.01)；I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内Hpa表达差异无显著性(p>0.05)(表2)。
表2 IMN与对照组患者肾小球Hpa和VEGF的表达情况
*:p<0.01 vs control group, **:p<0.05 vs control group
2.2.2 VEGF表达情况 VEGF在对照组正常肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有少量表达 ......
1 对象与方法
1.1 一般资料:病例来源于2005年11月至2007年8月间在本院肾内科病房诊治的36例原发性膜性肾病患者，所有患者均为首次经临床和病理确诊者。6例正常对照肾组织来自因肾脏良性肿瘤行一侧肾脏切除术患者，肾组织标本取自上述患者远离病灶周围的正常肾组织。
1.1.1 入选标准：肾组织所取标本经MASSON及MASSOM+PASM染色，在光镜下可见肾小球上皮下嗜复红蛋白沉积，肾小球基底膜弥漫均匀增厚、空泡变、或钉突形成、或链环样改变，且免疫荧光可见IgG、C3沿肾小球基底膜沉积的IMN患者。
1.1.2 排除标准：除外结缔组织病、肝炎病毒或慢性肝炎、恶性实体肿瘤相关性MN患者及肾穿刺活检前曾服用过皮质类固醇激素、细胞毒药物、他汀类降脂药物、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)及血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)类药物的IMN患者。
1.2 分组方法
1.2.1 实验组(IMN组)：36例IMN，男21例，女15例，平均年龄43岁。IMN组根据病理改变分期再分为两个亚组，其中I期IMN组30例，男18例，女12例，平均年龄45岁;II期IMN组6例,男3例,女3例,平均年龄33岁。
1.2.2 对照组：6例因肾脏良性肿瘤行一侧肾切除术患者，肾组织标本取自上述患者远离病灶周围的正常肾组织。男5例，女1例，平均年龄岁46岁。
1.3 临床观察指标:血清肌酐、白蛋白、24小时尿蛋白定量。
1.4 免疫组化检查:按SP法进行。肾组织切片3um，常规脱蜡、水化，3% H2O2室温下孵育。0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液(PH6.0)中行高压抗原修复。10%正常山羊血清封闭。一抗分别为兔抗人乙酰肝素酶单克隆抗体(稀释1∶75购自武汉博士德试剂公司)；兔抗人血管内皮生长因子单克隆抗体(稀释1∶300)，37℃孵育。生物素标记山羊抗兔、大鼠、小鼠和豚鼠IgG37℃孵育。辣根酶标记链酶卵白素工作液37℃孵育。DAB显色。苏木素复染。以PBS替代一抗作为阴性对照。
1.5 免疫组化结果判定:在胞浆或胞膜处有棕黄色或棕红色颗粒状物质沉积为阳性细胞。不着色为阴性。采用北航病理图像分析系统，通过光学显微镜放大400倍摄取图像，输入图像分析系统内，对图像进行灰度变换，使阳性面积与背景分开，进行自动测量。肾小球Hpa、VEGF免疫组化阳性面积测定：在光学显微镜计算机图像分析系统屏幕上，每例标本400倍镜下随机观察5个肾小球，分别计算每个指标的阳性面积与整个肾小球面积的比值，取其平均值作为每例标本每个指标肾小球阳性面积的比值。
1.6 统计学方法:统计学分析均采用SPSS11.0计算机软件包处理，计量资料采用均数±标准差表示，样本均数间比较采用t检验，组间比较采用方差分析，各参数间的相关性分析采用pearson 相关分析。 p<0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 临床指标(表1)
表1 各组患者尿蛋白及血肌酐含量
ALB:albumin; Scr:serum creatinine; Upro:urinary protein
2.2 免疫组化
2.2.1 Hpa表达情况:Hpa在对照组正常肾组织的肾小球基底膜、肾小球足细胞、系膜细胞及肾小管上皮细胞有少量表达。Hpa在IMN患者肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有表达。IMN I期组及II期组与对照组比较，肾小球内Hpa表达明显增强(p<0.01)；I期IMN组与II期IMN组比较，肾小球内Hpa表达差异无显著性(p>0.05)(表2)。
表2 IMN与对照组患者肾小球Hpa和VEGF的表达情况
*:p<0.01 vs control group, **:p<0.05 vs control group
2.2.2 VEGF表达情况 VEGF在对照组正常肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞有少量表达 ......
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