紫外线照射对体外培养人表皮黑素细胞雌激素受体的影响(2)
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注：*表示 P<0.05，与对照相比有显著性差异。
2.5 PSA免疫组织化学方法检测：免疫组化结果示:ER阳性表达主要在黑素细胞的核内,呈棕黄色。
2.6 雌激素受体基因mRNA的表达：照射组的雌激素受体基因mRNA的表达也明显高于对照组(0.58±0.021vs 0.19±0.034,p0.001)。
3 讨论
黑素细胞决定人类肤色及光线性色素沉着的产生。 雌激素受体 (ER)是一核转录因子，有ERa和ERB两亚型。体外培养人正常黑素细胞也表现了一种17β-雌二醇生物学效应，如含有雌二醇的人黑素细胞培养，培养第二天黑素细胞变形且树突增多，说明外源性雌激素在结构或功能上与内源性雌激素很相似，可模拟或干扰内源性雌激素功能，与人体各脏器雌激素受体结合后发挥作用[7]。雌激素与雌激素受体结合才发挥作用。研究表明，影响黑素细胞和黑素生成(包括色素沉着)的因素中，中波紫外线(UVB)、长波紫外线(UVA)以及角质形成细胞三者是最关键的。其中，UVB的影响力相对较大，它在刺激黑素细胞增生及诱导其凋亡方面都有显著影响，可促进黑素生成及能够导致延迟性色沉。
图4 PSA免疫组织化学染色阳性，胞核呈棕黄色(×200)
为了研究体外培养人黑素细胞对紫外线照射后黑素细胞雌激素受体的作用影响，进一步研究中国人黑素细胞对紫外线照射反应，我们采用体外培养人类黑素细胞作为研究对象，对其进行UVA和UVB的照射，然后分别采用MTT法测定照射前后的细胞数量变化;多巴比色法测定酪氨酸酶活性的变化; PSA免疫组织化学方法和半定量 RT—PCR法检测UVR照射后黑素细胞ER的表达。结果发现:UVA照射后，黑素细胞数量在低照射剂量时升高，高剂量时无明显变化;酪氨酸酶活性在低剂量时升高，高剂量时随着剂量加大而逐渐下降。UVB照射后，黑素细胞数量在低照射剂量时升高，在照射剂量到达某个临界点后随着照射剂量的增加而迅速降低;酪氨酸酶活性在低剂量时增加，在高剂量照射时继续保持高度活性，不随照射剂量增加而变化。以上结果与目前相关研究报道数据基本一致。另外，UVA和UVB照射后黑素细胞ER免疫组化结果表明均可产生棕黄色颗粒，主要定位于细胞核; 雌激素受体基因mRNA表达也明显高于对照组，提示雌激素受体表达确实与紫外线照射作用明显关联。
总之，我们利用体外培养黑素细胞方法，探讨UVA和UVB对于人黑素细胞在细胞数量、酪氨酸酶活性、雌激素受体等方面的影响，进一步明确了UVA和UVB对于黑素细胞增殖的最适剂量，初步了解了酪氨酸酶活性在不同波长、剂量紫外线照射下的变化，加深了雌激素对人体生理和病理状态下色素变化的认识，提高了内分泌系统与皮肤颜色关系的认识。通过本实验，使雌激素对人体皮肤色素形成的作用研究进一步扩大，同时也将会增加它在皮肤病临床应用的前景。
参考文献
[1]张宪旗，郑敏，牟宽厚等.8-甲氧沙林对黑素细胞内游离钙浓度及细胞骨架蛋白形成的影响[J].浙江大学学报(医学版)，2009，38(4)：348-350
[2] 王伯云，李玉松主编.病理学技术[M].北京人民卫生出版社。2000：423
[3] 赵辩，黄秋玲.人正常黑素细胞体外纯培养及其细胞生物学鉴定[J].临床皮肤科杂志,1991：(5)：226-228
[4] Boyd MR,Bacon TH,Sutton D. Antiherpesvirus activity of 9-(4-Hydroxy-3-Hydroxymelnylbut-1-yl) guanine (BRL 39123) in animals [J] ......
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