肺炎衣原体与慢性阻塞性肺疾病的相关性研究
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【摘要】目的:探讨肺炎衣原体感染与慢性阻塞性肺疾病(COPD)的临床相关性。方法:第一组(n46)是由于COPD急性加重而住院的病人。第二组COPD稳定期病人(n35)、对照组(n82)是参加呼吸疾病体检的老年人。结论:急性Cpn感染可能是COPD急性加重的一种病原体, 而慢性Cpn 感染可能是COPD发展的一种独立危险因素，Cpn-COPD相关性的全部临床意义有待于进一步研究。
【关键词】肺炎衣原体;慢性阻塞性肺疾病;微量免疫荧光; 阿齐霉素
【中图分类号】R374.2【文献标识码】B【文章编号】1008-6455(2011)08-0147-02
1 资料与方法
1.1 研究对象:选择2005年7月～2007年5月来院就医患者，第一组(n46) 是由于COPD的急性加重而住院的病人，男28例，女18例，平均年龄(70±12)岁。第二组COPD稳定期病人(n35)，男24例，女11例，平均年龄(70±10)岁；对照组(N82) 男47名, 女35名, 平均年龄(71±9)岁，均是参加呼吸疾病体检的健康志愿者。COPD诊断标准符合中华医学会呼吸病学分会制定的慢性阻塞性肺疾病诊断分期分级标准[1]，并排除COPD以外影响肺功能的疾病和其他系统的严重疾病，受试前6h内未吸入短效支气管扩张剂，12h内未吸入长效支气管扩张剂，所有患者均摄X线胸片。以上三组在性别、年龄、吸烟指数(年支)上均无显著性差异(见表1)。试验前经过医院临床医学伦理委员会批准，并取得受试者的知情同意。
1.2 血浆和PBMC的分离:采集静脉血3ml置于含有EDTA- Na2(0.01M)试管中,2000rpm离心10min, 吸出血浆备用。其余部分用于分离外周血单核细胞(PBMC)之用。PBMC的分离方法参照文献[2]：剩余血细胞用等量的磷酸盐缓冲液(PBS)稀释混匀,再沿离心管壁缓慢加入到含有3ml淋巴细胞分离液的离心管中。然后于室温2600rpm离心60min，用吸管小心吸出含PBMC的云雾状层，用低渗溶液洗涤PBMC 3次后备用。
表1 COPD患者组与对照组基本情况比较
注：FEV1/FVC：第一秒用力呼气容积/用力肺活量；第一组与对照组比较, aP<0.01(t10.209),bP<0.01(t14.081); 第二组与对照组比较, cP<0.01(t7.920),dP<0.01(t11.432)。
1.3 肺炎衣原体特异性抗体(IgA、IgG和IgM)的检测:以公认的MIF标准方法略加改进：抗原为Cpn TW-183原体(华盛顿基金会)用市售新鲜去脂牛奶按1∶10稀释(107ifu/ml)，荧光单抗和抗人FITC-IgA、 FITC-IgG和FITC-IgM用0.01%伊文氏兰PBS液按1∶40稀释。取Cpn抗原牛奶稀释液10μl分别在载玻片上涂出4个直径4～5mm的圆点，然后经微波炉中火加热1.5min，以使抗原充分暴露。描述的MIF检测血浆抗Cpn-特异性抗体(IgA、IgG和IgM)。每次试验均做阳性和阴性对照，并由2人在荧光显微镜下观察核对。诊断标准：IgA、IgM抗体阳性：滴度≥1∶16 、IgG抗体阳性：滴度≥1∶64。
2 结果
2.1 Cpn抗原:DIF法检测对照组PBMC中Cpn-Ag阳性13例，阳性率15.9%，COPD患者第一组PBMC标本, Cpn-Ag阳性28例, 阳性率60.9%，与对照组比较具有显著性差异，P﹤0.01。第二组阳性率22.9%，与对照组比较无差异。详细结果见表2。
2.2 PCR法检测PBMC中Cpn-DNA结果:对照组和患者组经DIF法检测Cpn-Ag后的PBMC剩余标本，用PCR法检测Cpn-DNA的阳性结果为：对照组12例和COPD患者组35例(与DIF法都是同一患者)。因此DIF法和PCR法检测PBMC的结果比较，有较好的特异性和一致性(P>0.05)。COPD患者组(n81)和对照组相比较，Cpn感染率有显著性差异(P<0.01)。但DIF法检测PBMC中Cpn-Ag更简便、快速、更适用于临床需要。此外，Cpn抗原检测能直接反映该个体有无Cpn活菌的存在, 因此抗原的检测比抗体具有更大的临床意义。
2.3 COPD患者组与对照组Cpn急性、慢性感染情况:以Cpn-Ag和Cpn-IgM为Cpn急性感染标记物,Cpn-IgA和IgG为Cpn慢性感染标记物检测结果见表3。
表2 DIF法检测PBMC中Cpn-Ag的结果
注：第一组与第二组比较，*P<0.05(Pearson X2 4.273)。
表3 COPD患者组与对照组Cpn急、慢性感染率比较
注：急性感染第一组与第二组比较, Pearson X23 ......
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