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编号:11365336
大鼠血浆中双嘧达莫的反相高效液相色谱法检测
http://www.100md.com 2006年12月1日 《医药世界》 2006年第12期
大鼠血浆中双嘧达莫的反相高效液相色谱法检测

     【摘要】 目的:建立大鼠血浆中双嘧达莫的检测方法。方法 采用RP-HPLC法测定大鼠血浆中的药物浓度,色谱柱为Lichrospher C18 (4.6×250 mm,5 μm),流动相为甲醇-水-冰乙酸(75∶25∶0.5 v/v)。结果 在0.1~8 mg/L-1范围内双嘧达莫峰面积与浓度线性关系良好(r=0.9995), 最低检测限为0.01 mg/L-1,绝对回收率为85.8%~94.3%,准确度为94.9%~104.7%,日内RSD为2.2%~6.6%,日间RSD为5.9%~11.4%。结论 本测定方法灵敏、准确、简便,适合于双嘧达莫的药代动力学研究。

    关键词:双嘧达莫;血浆;RP-HPLC

    Determination of dipyridamole in rats plasma by RP-HPLC

    AbstractAIMTo develop a simple,sensitive and rapid method for the determination of dipyridamole in rats plasma.METHODThe plasma concentration of dipyridamole was determined by RP-HPLC method ,the analysis involved a 250 mm × 4.6mm column packed with C18(5 um),the mobile phase consisted of methyl alcohol-water-glacial acetic acid (75:25:0.5)RESULTA good linearity was obtained in the range of 0.1~8 mg稬-1(r=0.9995),the recovery was between 85.8%~94.3%,the accuracy was between 94.9%~104.7%,and the minimal detectable concentration in human plasma was 0.01 mg稬-1. the intra-day RSD is 2.2%~6.6% and the inter-day RSD is 5.9%~11.4%.CONCLUSIONThe result demonstrated that the method was sensitive,accurate and simple for the determination of dipyridamole in rats plasma,it was suitable for the pharmacokinetics study of dipyridamole.
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    Key wordsdipyridamole; plasma; RP-HPLC

    双嘧达莫(Dipyridamole),又称潘生丁(Persantin),对冠状血管有较强的扩张作用,可显著增加冠脉流量,能抑制血小板聚集。临床主要用于血栓栓塞性疾病及缺血性心脏病[1,2]。最近几年潘生丁的临床应用日趋拓宽,文献报道其对血栓栓塞性脉管炎、肾病综合症和上呼吸道感染等疾病均有良好的效果[3]。潘生丁的

    血药浓度测定及临床药代动力学研究文献报道较少,本文建立了大鼠血浆中潘生丁的反相高效液相色谱测定法,可广泛用于治疗药物检测及临床药代动力学研究。

    1 试药与仪器

    1.1仪器

    日本岛津LC-10A高效液相色谱仪,N2000型色谱工作站(浙江大学智能信息工程研究所),TGL-16B高速离心机(上海安亭科学仪器厂),XW-80A旋涡混合器(上海精科有限公司)。
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    1.2药品与试剂

    潘生丁对照品由中国药品生物制品鉴定所提供,甲醇为色谱纯(山东禹王实业有限公司禹城化工厂),已腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司),自制纯净水。

    1.3 动物

    SD大鼠,200~240g,由青海地方病研究所动物中心提供。

    2 方法

    2.1 色谱条件

    色谱柱:Lichrospher C18 (4.6×250 mm,5 μm),流动相:甲醇-水-冰乙酸-三乙胺(75∶25∶0.5 v/v),流速:1 mL?min-1,检测波长:283 nm,进样量:20 μL。

    2.2 对照品溶液配制
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    精密称取潘生丁10 mg置10 mL容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得1 mg.mL-1潘生丁的储备液。以此标准储备液稀释配制成各种浓度的对照品溶液。

    2.3 样品处理

    取大鼠血浆样品0.5 mL于离心管中,加入0.5 mL的已腈,涡漩1 min,16000 r?min-1离心10 min,取上清液20 uL,用HPLC法进行测定。

    2.4 色谱行为

    在本实验条件下,潘生丁的保留时间约为6.3 min,此峰与杂质分离良好,色谱图见图1。

    2.5 标准曲线制备及最低检测浓度测定

    取离心管数支,分别加入大鼠空白血浆0.5 mL与潘生丁对照品溶液适量,配成浓度为0.1,0.2,0.5,1,2,4,6,8 mg?L-1的标准血浆样品,涡漩混匀后按“样品处理”项下操作,每种浓度做5份,记录峰面积。以潘生丁峰面积A对浓度C进行回归计算,得回归方程:A=19773×C-2107,r=0.9995。按上述条件测得大鼠血浆中潘生丁最低检测限为0.01 mg·L-1。
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    2.6 精密度试验

    按“标准曲线制备”项下操作,配制浓度为0.1,2,8 mg?L-1的潘生丁标准血浆样品,按“样品处理”项下操作,测得低、中、高三种浓度的日内与日间精密度分别为6.6%、4.5%、2.6%和11.4%、7.6%、5.9%。

    2.7 回收率试验

    取离心管数支,分别加入潘生丁对照品溶液适量,以甲醇配成含潘生丁分别为0.1,2,8 mg?L-1的溶液,每份0.5 mL,以氮气吹干后,用0.65 mL流动相溶解残渣,精密吸取20 uL进样分析,记录色谱图得样品峰面积As。另取离心管数支,分别精密加入不同量的潘生丁对照品溶液及0.5 mL空白血浆,涡旋1 min,配成含潘生丁0.1,2,8 mg?L-1的血浆样品,每种浓度各做5份样品,按“样品处理”项下操作,记录色谱图得样品峰面积Ax。上述Ax和As的比值即为潘生丁的绝对回收率(R%)。结果测得低、中、高三种浓度的回收率分别为85.8%、90.1%和94.3%。
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    2.8 准确度试验

    将前述日间精密度中0.1,2,8 mg?L-1系列浓度的峰面积As代入前述标准曲线方程,计算所得浓度和加入浓度的比值即为准确度。结果测得低、中、高三种浓度的准确度分别为94.9%、95.5%和104.7%。

    3 讨论

    文献报道杨鹏晖等[4]用荧光分光光度法测定了潘生丁的血清浓度,灵敏度虽较高,但干扰因素多且用提取法处理血清样品,操作繁琐,不宜用于药代动力学的研究,本文建立的大鼠血浆中潘生丁的RP-HPLC测定方法,简便,准确,灵敏度高。

    范建宏等[5]采用甲醇-水-冰乙酸-三乙胺作为流动相,虽然所得色谱图峰形好,干扰少,但经作者反复试验,流动相中加入三乙胺可明显降低样品回收率。本文所建方法流动相为甲醇-水-冰乙酸混合溶液,在此流动相条件下,基线平稳,干扰少,样品分离良好。
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    考察分析了已腈、甲醇和乙醇三种沉淀试剂,结果表明甲醇和乙醇沉淀蛋白不完全,样品离心后上清液仍较浑浊且灵敏度偏低,已腈沉淀蛋白的能力较强,故最终选择已腈为沉淀试剂。根据文献报道,当已腈与血浆的体积比为2比1时,已腈沉淀蛋白的能力最强[6],但实验过程中发现,等体积的已腈就可满足实验要求,故确定已腈与血浆的体积比为1比1。

    本实验干扰少,灵敏度高,操作简便,适合于潘生丁的药代动力学研究。

    参考文献

    1 陈新谦,金有豫.新编药物学.第14版.北京:人民卫生出版社,1996.268,406.

    2 吴旭升,常晓芳.复方血栓通联潘生丁治疗冠心病心绞痛.中西医结合心脑血管病杂志,2005; 3(7):637-638.

    3 魏开敏.潘生丁临床新用途.解放军健康,2001;(1): 35-35

    4 杨鹏晖,屠锡德.复方潘生丁胃内滞留漂浮型控释片的制备及药动学研究.中国药科大学学报,1992;23(1):14-18.

    5 范建宏,李向阳.人血浆中潘生丁的检测.青海医学院学报,2005,26(1):44~46.

    6 曾经泽.生物药物分析. 北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1998,28., http://www.100md.com(李积东)