人参总皂苷对ＭＡＧＥ－12的Ｂ细胞表位抗体增效作用研究
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摘要：目的:研究人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体的增效作用。方法:将C-57BL/6小鼠随机分为对照组、MAP组、人参总皂苷组，MAP组在预测MAGE-12的B细胞表位序列为QSDEGSSNEEQE(82-93)的基础上，采用4分枝多重抗原肽结构设计合成抗原肽，免疫C-57BL/6小鼠，产生多克隆抗体，应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为人的抗原肽的特异性抗体。人参总皂苷组在MAP抗原肽免疫小鼠的同时，人参总皂苷灌胃给药， 0.2mL/20g，每日1次。结果：免疫C-57BL/6小鼠后可产生MAGE-12的抗原特异性的多克隆抗体，且人参总皂苷组抗体效价高于MAP组，达1∶256。 结论：人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体有增效作用。
关键词：B细胞表位； 表位预测； MAGE-12；人参总皂苷；ELISA；增效
中图分类号：R285.5
文献标识码：A
文章编号：1673-7717(2007)04-0689-03
在在过去十几年里，肿瘤抗原的研究取得了很大的进步，这为肿瘤特异性免疫治疗奠定了良好的基础。而肿瘤抗原表位生物学的研究是过渡到临床应用的重要前提。MAGE-12是1994年发现的肿瘤特异性抗原，它分布于各种组织型的肿瘤中，除睾丸和胎盘外正常组织不表达，提示是较为理想的靶抗原。本研究在过去预测的MAGE-12的B细胞表位基础上[1]，采用4分枝多重抗原肽结构(MAP, multiple antigenic peptide system)设计合成抗原肽，免疫C-57BL/6小鼠[2]，同时，人参总皂苷灌胃给药， 0.2mL/20g，每日1次，产生多克隆抗体，应用ELISA实验检测多克隆抗体是否为抗原肽的特异性抗体，旨在了解人参总皂苷对MAGE-12的B细胞表位抗体增效作用，为人参总皂苷作为肽疫苗黏膜佐剂的应用提供实验依据。为基于MAGE-12的临床主动免疫治疗研究提供新的手段。
1材料和方法
1.1主要仪器
BIO-RAR Model3500自动酶联检测仪；超声波粉碎器(Somc＆Material,Inc公司)；ABI431A型多肽合成仪(美国PE公司)；FA1104型电子天平(上海天平仪器厂)；Model3550自动酶联检测仪(美国BIO-RAD公司)。
1.2主要试剂
人参总皂苷重庆中药研究所提供；包被物(树脂切割肽)；酶标抗体(辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG)预先滴定工作浓度；SP9002试剂盒：购自北京中山生物技术有限公司 ；完全佐剂(购于北京中山公司)；不完全佐剂(购于北京中山公司)；HMP树脂(美国PE公司)；多肽合成用氨基酸(美国PE公司)；多肽合成试剂(均出自美国PE公司)：哌啶、DMAP、甲醇、HOBt、DCC、DCM、NMP；苯甲硫醚(Sigma)；EDT(Sigma)；TFA(TEDLA)； DMSO(苏州正兴化工研究所)；乙氰(TEDLA) ......
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