闭后PVDF膜置于含兔抗鼠多克隆抗体(一抗)的上述封闭液中室温摇床孵育1h，用TTBS缓冲液洗膜3次，15min/次；再将PVDF膜置于含羊抗兔多克隆抗体(辣根过氧化物酶标记的二抗)的上述封闭液中室温摇床孵育1h，用TTBS缓冲液洗膜3次，15min/次；再用TBS缓冲液洗膜1次，10min。将已用二抗标记了的PVDF膜与ECL化学发光试剂反应，在暗室与X光胶片曝光后显影。用Scion image1.62c软件测条带灰度值，计算目的蛋白与看家蛋白(GAP-DH)的灰度比值。检测时以GAPDH为内参照，以CYP1A2、CYP2E1、CYP3A1、CYP3A2与GAPDH蛋白表达量灰度的比值作为P450亚酶蛋白质表达的相对水平。所有蛋白质免疫印迹的结果都在同组不同样品上得到重复。

    1.8总RNA的提取大鼠处死后迅速取出肝脏，置于液氮中保存。按Promaga公司RNA提取试剂盒说明书提取肝脏总RNA。电泳分析表明总RNA片段未降解，18S和28S条带清晰可见，A₂₆₀A₂₈₀比值在1.6与1.8之间，所提总RNA可用。

    1.9反转录聚合酶链式反应(RT-PCR) 采用Promaga公司的，RT-PCR一步法试剂盒说明书进行。将CYP1A2、CYV2E1、CYP3A1、CYP3A2及CYC(看家基因)等体积的RT-PCR产物10μL上样，经1.5%琼脂糖凝胶电泳辨认，拍照。检测时以CYC基因的RT-PCR产物为内参照 ......