1.4免疫组化法检测肿瘤VEGFHIF-1α和MVD 移植瘤组织10%甲醛液固定，石蜡切片，免疫组化染色按SP试剂盒操作说明书进行，VEGF、b-FGF、HIF-1α、MMP-2、CD105抗体工作液浓度均为1∶100。结果判定VEGF、HIF-1α、MMP-2表达：细胞胞质染成棕黄色为表达阳性，表达强度用高清晰度彩色图像分析系统测定5个视野的光密度，取其平均值。MVD测定按Weidner等^[3]法：先用40倍光镜扫视整个切片选3个微血管较多的区域，然后在250倍光镜视野下计数被抗CD105抗体染成棕色的血管数目。以3个250倍视野下血管数目的平均数来表示MVD。单个内皮细胞着色也视为一个新生血管。算出微血管数目，取其平均值作为MVD值。

    1.5 Western blot检测检测各组VEGF HIF-1α蛋白含量 取移植瘤组织，PBS冲洗，剪碎、匀浆，加入细胞裂解液，4℃裂解20min，收集细胞裂解液，离心，取上清加入电泳上样缓冲液100℃煮5min，聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。将蛋白转印至硝酸纤维素膜上(4℃过夜)，以5%脱脂奶粉封闭液封闭2h，加入按1∶200稀释的一抗(兔抗鼠HIF-1α、MMP-2多隆抗体)，37℃平缓摇动1.5h。平缓摇动洗涤3次，置于另一新杂交袋中，加入以1∶1000稀释于封闭液中的HRP标记的羊抗兔IgG抗体。37℃摇动1 h，TBST液洗膜3次×10min，ECL系统显色 ......