黄丹凝胶抗炎及免疫抑制作用的实验研究(2)
1.4 试剂
抗小鼠L3T4、LYT2单克隆抗体及荧光抗体均购自武汉晶赛生物科技有限公司。
2实验方法
2.12,4-二硝基氯苯(DNCB)诱发的小鼠迟发型超敏实验
2.1.1分组 实验小鼠随机分为4组,每组10只:黄丹凝胶组,地塞米松软膏组,生理盐水组,正常对照组。
2.1.2方法 除正常对照组外,其它3组于实验前1天用10%硫化钠在小鼠腹部固定部位3cm×1cm面积脱毛,温水洗净。实验第1、2天(致敏期)于小鼠腹部脱毛部位涂1%DNCB,每天1次,每次20μL,第3、4、5天不涂药。第6天(诱发期)于小鼠左耳背涂20μL 0.5%DNCB诱发皮炎,右耳背涂1∶1丙酮甘油20μL作对照,正常对照组不作任何处理。
除正常对照组外,其它3组自第1次涂DNCB前2h开始于两耳处涂相应药物(软膏20μL/只,生理盐水0.3mL/只),每日3次,连续用药5天(第1、2、3、4、5天),第6天于诱发前2h及诱发后4h各涂药1次。正常对照组不作任何处理。
2.1.3 耳重量 与诱发后24h后断头处死小鼠,剪下双耳,用直径0.6cm的打孔器在左右耳中部相同位置打下组织块,电子天平称重。计算两耳重量之差,作为炎症反应强度的指标。
2.1.4 免疫器官脏器指数 处死小鼠后,取出每只小鼠的胸腺、脾脏,用电子天平称重,求出脏器指数(脏器重量 mg/10g体重)。
2.1.5 脾脏T淋巴细胞亚群CD4 CD8荧光值 采用间接免疫荧光法 ......
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