芹黄素通过抗氧化作用减轻阿霉素对正常血细胞的损伤(2)
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1.2 主要试剂和仪器
RPMI 1640培养基、芹黄素(apigenin,提取自欧芹,薄层色谱法分析纯度为95%)、四甲基偶氮唑蓝(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)、均购自Sigma公司;ROS荧光探针二氯荧光素双醋酸盐(DCFH-DA)购于Invitrogen公司;胎牛血清购于杭州四季青生物工程材料有限公司;注射用盐酸阿霉素(adriamycin,ADR)购于深圳万乐药业有限公司;丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)检测试剂盒及考马斯亮兰蛋白定量试剂盒均购于南京建成生物医学工程研究所。其余试剂均为国产分析纯。芹黄素先用DMSO溶解,配成浓度为2.5×10-2mol/L的母液,然后再用培养基稀释成所需工作浓度。Infinite M200型酶标仪为瑞士TECAN公司产品,CKX-31倒置显微镜为日本Olympus公司产品,DL-5000B低速冷冻离心机为上海安亭科学仪器厂产品,BILON96-11型超声波细胞粉碎仪由上海比朗仪器有限公司生产。
1.3实验分组
实验分为空白对照组(Con)、芹黄素组(Api)、阿霉素组(ADR)、阿霉素作用1 h后加芹黄素组(ADR+Api)。阿霉素设0.75、1.5、3.0、6.0和12.0 μmol/L 5个浓度组,每组设8个复孔,48 h后以MTT法测定不同浓度阿霉素对K562细胞的增殖抑制率,以IC50浓度作为后续实验的工作浓度 ......
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