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编号:11486048
异氟醚预处理延迟相对兔缺血再灌注心肌Bcl-2蛋白表达及IL-10水平的影响(2)
http://www.100md.com 2007年8月15日 《现代医药卫生》 2007年第16期
     1.3 检查指标:(1)IL-10测定:各组分别于左冠前降支阻断前20 min(T1)、左冠前降支阻断20 min(T2)、左冠前降支阻断40 min(T3)、心肌再灌注1h(T4)、心肌再灌注2h(T5)5个时点取颈内动脉血测定IL-10(夹心ELISA法)的水平。(2)心肌梗死面积测量: 再灌注2h后再次阻断冠状动脉,自颈内动脉逆向注入2%伊文思蓝2 ml进行心肌染色,以区分缺血(无蓝色)和非缺血组织(蓝色),迅速取出心脏,将其水平切成约2 mm的薄片,剪除右室和非缺血组织后分别测质量,然后将缺血心肌片用0.5%TTC磷酸缓冲液(pH=7.4)孵育(37℃)15 min,以确定梗死组织, 再将坏死区(灰白色)和非坏死区(深红色)分离测质量,缺血和梗死面积以其占左室质量的百分比表示并计算缺血和梗死心肌面积。(3)心肌免疫印迹分析(Western blot analysis):参考文献方法提取心肌蛋白[5]。提取的心肌蛋白储存于-70℃备用。各样本取100 μg心肌蛋白于12.5%聚丙烯酰胺凝胶进行电泳,分离的心肌蛋白随后通过Pharmcia Nova Blot电转印装置转印至PVDF膜,膜在封闭液中室温作用3 h。再加入兔抗Bcl-2抗体 ......
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