关于筛选抗耐药性大肠杆菌的中草药抑菌实验
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文章编号：1009-5519(2008)17-2628-02 中图分类号：R28 文献标识码：B
中草药作为我国特有的中医药理论与实践的产物，对细菌有一定的抑制作用，以其低毒、无药物残留、耐药性发生率低的独特优势，被广泛地应用于临床上，用来治疗各种感染性疾病。因此中草药的抑菌效果研究是目前医学研究的主要方向之一，我们通过筛选有效抑菌实验抑制耐药性大肠杆菌生长，为选择敏感中草药治疗耐药性大肠杆菌引起的疾病奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料：(1)中药：黄芩购自广西一心药业百色连锁店。(2)菌种：耐药性大肠杆菌由右江民族医学院微生物学教研室分离、鉴定、保存。经青霉素和红霉素的标准药敏纸片(购自杭州天和生物有限公司)测定为耐药。(3)试剂： M-H培养基、NS购自杭州天和生物有限公司。(4)其他材料：滤纸、培养皿、棉签等购自杭州天和生物有限公司。
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1.2 方法
1.2.1 煮沸法提取药液[1]：黄芩50 g加水过药面，文火煎煮，煎煮时间第一次1.5 h，第二次40 min，第三次30 min。将3次药液合并后浓缩为100 ml(相当于每毫升0.5 g生药)，再取第一次浓缩液10 ml，将其浓缩为5 ml的二次浓缩液(相当于每毫升1.0 g生药)。将第二次浓缩液保存备用。
1.2.2 自制药敏纸片：制作直径6 mm的滤纸纸片，高压灭菌后烘干，然后把滤纸片浸泡于第二次浓缩液中过夜，60 ℃烘干箱烘干，无菌保存备用。
1.2.3 K-B法药敏试验[2]：(1)按每1000 ml蒸馏水称取Muller-hinton Agar 38 g配备M-H琼脂，按每个平皿(直径9 mm)25 ml进行分装。(2)将孵育16～24 h的菌种分别接种生理盐水试管中，校正浓度至0.5麦氏标准(相当于1.0×108 CFU/ml)。(3)用无菌棉签拭蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液后在M-H琼脂表面均匀涂布接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周。(4)平板在室温下干燥3～5 min后用无菌镊子将药物纸片紧贴于琼脂表面，置35 ℃孵育16～18 h。记录抑菌圈的直径，实验重复10次。
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1.2.4 打孔法药敏实验：待M-H平板干后，用无菌棉签蘸取菌液(相当于1.0×108 CFU/ml)，在培养基平板上密集划线接种。盖好平皿，放置 5 min，待平板表面水分吸收后，用直径6 mm无菌金属打孔器在平皿内打孔，除去洞内琼脂，用微量移液器吸取50 μl第二次浓缩液加入洞内，37 ℃培养 16～18 h，记录抑菌圈的直径，实验重复10次。
1.2.5 统计学方法使用t检验。
1.2.6 观察结果
2 结果(见表1)
3 讨论
实验中选用的黄芩具有清热解毒、健脾润肺攻积导滞、泻火凉血、活血祛淤和利胆退黄等临床疗效，并且富含各种生物碱、有机酸等有效成分及广谱抗菌抗病毒成分。试验使用两种不同方法测定提取物对耐药性大肠杆菌抑菌效果。结果表明，黄芩对耐药性大肠杆菌有良好的抑菌效果。但是哪些成分对耐药性大肠杆菌有作用，如何提取有效成分是值得我们继续研究的内容。实验还对两种不同的抑菌方法进行了比较，结果无显著差异。说明我们自制的药物敏感纸片及使用的方法可用于筛选中草药的抑菌效果。
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中草药的抑菌实验是目前研究的主要课题之一。如何筛选效果良好的抑菌药物，以及提取中草药的有效成分确定分子结构，对研究中草药，帮助阐述中草药的理论知识有重要的作用。我们目前的研究只是药物的筛选以及方法的探索，希望同行能共同加快中草药的研究进程，解决细菌耐药性难题。
参考文献：
[1] 陈 奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1988.69.
[2] 张卓燃，忘世仪，田延东，等.医学微生物实验学[M].北京：科学出版社，2003.26.
收稿日期：2008-04-09, 百拇医药(黄衍强 秦静英 李晓华 陈源红 黄干荣)