金莲花总黄酮提取工艺研究
【摘要】金莲花抗菌抗病毒的主要成分为黄酮昔类物质，通过实验，对莲花分别进行了甲醇回流提取、水煎煮提取和乙醇超声提取其总黄酮并
以精制，以得到符合要求的提取物。
【关键词】金莲花;黄酮;提取工艺
【中图分类号】R284.2
【文献标识码】A【文章编号】1009-6019(2009)-04-0028-1
1 引言
金莲花属植物作为药用由来已久，始载于(本草纲目拾遗)。金莲花抗菌抗病毒的主要成分为黄酮昔类物质，具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化、抗突变、抗过敏、抗辐射等作用和增强免疫能力等广谱的生理活性。故提取其总黄酮并加以精制，以得到符合要求的提取物。
, 百拇医药
2 实验
2.1 方法探讨
通过实验，对金莲花分别进行了甲醇回流提取、水煎煮提取和乙醇超声提取，并将不同提取物制成测试样品溶液，以芦丁作为对照品，采用可见分光光度法测定各样品溶液中的总黄酮含量。结果表明，水提取法中总黄酮含量最高，而超声提取法最低，甲醇回流提取居中，但水提取法和乙醇超声法提取液颜色深，杂质多，而甲醇提取液杂质较少。本实验选择水为溶剂，提取金莲花总黄酮，并通过适当的精制方法去除其杂质。
2.2 金莲花水提液的制备
取金莲花的干燥花适量，以Al倍量的水煎煮B分钟，过滤后药渣加入A2倍量的水再煎煮B分钟，合并其滤液，浓缩至浸膏比重为1.20(波美比重计)，加入浓度为C的乙醇，使浸膏含醇量达到60%，放冷，将醇沉液冷藏24小时，过滤回收乙醇至浸膏比重为1.20，加入适量水，使药液ml:药材(g)=l:1，烧沸后冷藏24小时，过滤，补加适量水，使药液ml:药材(g)=l:1，得金莲花的水提取液。
, 百拇医药
将加水量(A)、煎煮时间(B)、醇沉浓度(C)作为考察因素，每个因素各选三个水平。根据因素水平选择L9(34)正交表，并安排相关实验内容。
2.3 工艺流程
金莲花加水煎煮2次，过滤产生滤液。浓缩至比重为1.2，加入乙醇，使含醇量为60%，冷藏，过滤产生醇液，回收乙醇，至比重为1.2产生浓缩液，加水调整，煮沸，冷藏，过滤，补加适量水产生金莲花水提物。
2.4 样品的含量测定
总黄酮是金莲花抗菌、抗病毒的有效部位，因此在金莲花及其制剂的质量控制等方面一般多采用分光光度法对其进行测定，具有方法稳定、简便快速、准确可靠等优点。通常，总黄酮的测定多采用芦丁为对照品，检测波长为340nm，或用亚硝酸钠一硝酸铝对其进行显色后于500nm波长处测定其含量。
, http://www.100md.com 本实验以芦丁为对照品，选择亚硝酸钠一硝酸铝显色法，于500nm波长处对其进行含量测定。
标准曲线制定。精密称取于105℃下常压干燥至恒重的芦丁对照品适量，置50ml容量瓶中，加入甲醇35ml，水浴微热使溶解，放冷至室温后，以甲醇定容。精密量取5ml置于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。精密量取该溶液0.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置于25ml容量瓶内，各加水至6ml，再分别加入5%NaNO2溶液1ml，依次每隔6min加入10%AL(NO3)3溶液1ml、4%NaOH溶液10ml，最后用水稀释定容，摇匀，放置巧min。在500nm处测定其吸收度，考察标准溶液浓度与吸收度的线性关系，得到回归方程A=11.0520C-0.0003(r=0.9989)，表明总黄酮以芦丁计在0-0.048mg/mL范围内线性关系良好。
方法学考察。取芦丁对照品溶液5份每份3ml，显色后，在500nm处测定其吸收度，进行精密度实验，测定结果表明，仪器精密度较好。芦丁溶液经过显色后不稳定，因此取芦丁对照品溶液2份每份3ml，经显色后，在5、10、15min内测定其吸收度。数据显示，芦丁对照品溶液在显色后15min以内稳定性较好，应尽快完成测量实验。
, 百拇医药
样品溶液制备及含量测定。按照金莲花水提液的制备方法，制备9组供试样品溶液并转移至蒸发皿中，水浴蒸干，于烘箱内70℃下干燥，称量，计算其收膏率。根据实际情况进行多指标综合评价，将干膏中总黄酮含量的权重系数定为0.8，由于在有效成分显著的前提下，纯度越高收膏率越低，故设收膏率的权重系数为-0.2。各指标的评分结果规定为权重系数乘以各质量分数与组内最大质量分数的百分比，评估指数为干膏中总黄酮含量、收膏率两个指标评分之和，进行方差分析，依据分析结果确定金莲花提取的最佳工艺。
3 结果分析
3.1 方差分析
对实验数据进行直观分析和方差分析，其结果表明，因素A和因素C对该工艺影响显著，影响大小为C>A>B，最佳工艺条件为A3B2C1，即:两次加水的量分别为14倍量和12倍量，煎煮时间每次1小时，醇沉浓度为75%。
3.2 重现性分析
, 百拇医药
在确定最佳的提取工艺条件后，对其进行重现性考察实验按优化的实验条件提取测定三次，进一步考察该方法的重现性结果表明此工艺重现性良好、稳定可行。
3.3 样品溶液稳定性实验
精密称取一定量的干燥金莲花提取物，甲醇溶解，于100ml容量瓶内定容，制得样品溶液。于0、2、4、6、8、24h时，取该溶液适量，显色，在500nm处测定其吸收度。结果显示此样品溶液稳定性较好。
金莲花总黄酮溶液经过显色后不稳定，因此取上步制得的样品溶液2份每份3ml，经显色后，在5、10、15min内测定其吸收度。结果表明，金莲花总黄酮在显色后15min以内稳定性较好，应尽快完成测量实验。
4 讨论
采用此法从金莲花中提取有效药用成分总黄酮，确定了其最佳工艺条件，最高提取率可达24.19%，为工业化生产提供了基础实验数据。
, http://www.100md.com
参考文献:
[1]宋冬梅、孙启时：《金莲花属植物研究进展》，《沈阳药科大学学报》，2005年第5期.
[2]辛春兰、潘海峰：《金莲花的研究进展》，《承德医学院学报》，2003年第4期.
[3]段蕊、王蓓、时海峡：《微波法提取银杏叶黄酮最佳工艺研究》，《淮海工学院学报》，2001年第9期.
[4]朱殿龙、丁万隆、陈士林：《金莲花属植物的研究进展》，《中医药现代化》，2006年第4期.
[5]丁万隆、陈震、陈君：《金莲花属药用植物资源及利用》，《中国野生植物资源》，2003年第12期., http://www.100md.com(黄 强 杨晓兵 杨 波)
以精制，以得到符合要求的提取物。
【关键词】金莲花;黄酮;提取工艺
【中图分类号】R284.2
【文献标识码】A【文章编号】1009-6019(2009)-04-0028-1
1 引言
金莲花属植物作为药用由来已久，始载于(本草纲目拾遗)。金莲花抗菌抗病毒的主要成分为黄酮昔类物质，具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎抑菌、抗病毒、抗氧化、抗突变、抗过敏、抗辐射等作用和增强免疫能力等广谱的生理活性。故提取其总黄酮并加以精制，以得到符合要求的提取物。
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2 实验
2.1 方法探讨
通过实验，对金莲花分别进行了甲醇回流提取、水煎煮提取和乙醇超声提取，并将不同提取物制成测试样品溶液，以芦丁作为对照品，采用可见分光光度法测定各样品溶液中的总黄酮含量。结果表明，水提取法中总黄酮含量最高，而超声提取法最低，甲醇回流提取居中，但水提取法和乙醇超声法提取液颜色深，杂质多，而甲醇提取液杂质较少。本实验选择水为溶剂，提取金莲花总黄酮，并通过适当的精制方法去除其杂质。
2.2 金莲花水提液的制备
取金莲花的干燥花适量，以Al倍量的水煎煮B分钟，过滤后药渣加入A2倍量的水再煎煮B分钟，合并其滤液，浓缩至浸膏比重为1.20(波美比重计)，加入浓度为C的乙醇，使浸膏含醇量达到60%，放冷，将醇沉液冷藏24小时，过滤回收乙醇至浸膏比重为1.20，加入适量水，使药液ml:药材(g)=l:1，烧沸后冷藏24小时，过滤，补加适量水，使药液ml:药材(g)=l:1，得金莲花的水提取液。
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将加水量(A)、煎煮时间(B)、醇沉浓度(C)作为考察因素，每个因素各选三个水平。根据因素水平选择L9(34)正交表，并安排相关实验内容。
2.3 工艺流程
金莲花加水煎煮2次，过滤产生滤液。浓缩至比重为1.2，加入乙醇，使含醇量为60%，冷藏，过滤产生醇液，回收乙醇，至比重为1.2产生浓缩液，加水调整，煮沸，冷藏，过滤，补加适量水产生金莲花水提物。
2.4 样品的含量测定
总黄酮是金莲花抗菌、抗病毒的有效部位，因此在金莲花及其制剂的质量控制等方面一般多采用分光光度法对其进行测定，具有方法稳定、简便快速、准确可靠等优点。通常，总黄酮的测定多采用芦丁为对照品，检测波长为340nm，或用亚硝酸钠一硝酸铝对其进行显色后于500nm波长处测定其含量。
, http://www.100md.com 本实验以芦丁为对照品，选择亚硝酸钠一硝酸铝显色法，于500nm波长处对其进行含量测定。
标准曲线制定。精密称取于105℃下常压干燥至恒重的芦丁对照品适量，置50ml容量瓶中，加入甲醇35ml，水浴微热使溶解，放冷至室温后，以甲醇定容。精密量取5ml置于50ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。精密量取该溶液0.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml，分别置于25ml容量瓶内，各加水至6ml，再分别加入5%NaNO2溶液1ml，依次每隔6min加入10%AL(NO3)3溶液1ml、4%NaOH溶液10ml，最后用水稀释定容，摇匀，放置巧min。在500nm处测定其吸收度，考察标准溶液浓度与吸收度的线性关系，得到回归方程A=11.0520C-0.0003(r=0.9989)，表明总黄酮以芦丁计在0-0.048mg/mL范围内线性关系良好。
方法学考察。取芦丁对照品溶液5份每份3ml，显色后，在500nm处测定其吸收度，进行精密度实验，测定结果表明，仪器精密度较好。芦丁溶液经过显色后不稳定，因此取芦丁对照品溶液2份每份3ml，经显色后，在5、10、15min内测定其吸收度。数据显示，芦丁对照品溶液在显色后15min以内稳定性较好，应尽快完成测量实验。
, 百拇医药
样品溶液制备及含量测定。按照金莲花水提液的制备方法，制备9组供试样品溶液并转移至蒸发皿中，水浴蒸干，于烘箱内70℃下干燥，称量，计算其收膏率。根据实际情况进行多指标综合评价，将干膏中总黄酮含量的权重系数定为0.8，由于在有效成分显著的前提下，纯度越高收膏率越低，故设收膏率的权重系数为-0.2。各指标的评分结果规定为权重系数乘以各质量分数与组内最大质量分数的百分比，评估指数为干膏中总黄酮含量、收膏率两个指标评分之和，进行方差分析，依据分析结果确定金莲花提取的最佳工艺。
3 结果分析
3.1 方差分析
对实验数据进行直观分析和方差分析，其结果表明，因素A和因素C对该工艺影响显著，影响大小为C>A>B，最佳工艺条件为A3B2C1，即:两次加水的量分别为14倍量和12倍量，煎煮时间每次1小时，醇沉浓度为75%。
3.2 重现性分析
, 百拇医药
在确定最佳的提取工艺条件后，对其进行重现性考察实验按优化的实验条件提取测定三次，进一步考察该方法的重现性结果表明此工艺重现性良好、稳定可行。
3.3 样品溶液稳定性实验
精密称取一定量的干燥金莲花提取物，甲醇溶解，于100ml容量瓶内定容，制得样品溶液。于0、2、4、6、8、24h时，取该溶液适量，显色，在500nm处测定其吸收度。结果显示此样品溶液稳定性较好。
金莲花总黄酮溶液经过显色后不稳定，因此取上步制得的样品溶液2份每份3ml，经显色后，在5、10、15min内测定其吸收度。结果表明，金莲花总黄酮在显色后15min以内稳定性较好，应尽快完成测量实验。
4 讨论
采用此法从金莲花中提取有效药用成分总黄酮，确定了其最佳工艺条件，最高提取率可达24.19%，为工业化生产提供了基础实验数据。
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参考文献:
[1]宋冬梅、孙启时：《金莲花属植物研究进展》，《沈阳药科大学学报》，2005年第5期.
[2]辛春兰、潘海峰：《金莲花的研究进展》，《承德医学院学报》，2003年第4期.
[3]段蕊、王蓓、时海峡：《微波法提取银杏叶黄酮最佳工艺研究》，《淮海工学院学报》，2001年第9期.
[4]朱殿龙、丁万隆、陈士林：《金莲花属植物的研究进展》，《中医药现代化》，2006年第4期.
[5]丁万隆、陈震、陈君：《金莲花属药用植物资源及利用》，《中国野生植物资源》，2003年第12期., http://www.100md.com(黄 强 杨晓兵 杨 波)