②PCR扩增 取21 eDNA，2μg 10×PCR—Buffer，2μl 10 mmol/L dNTP，Primer上游、下游各0.2μl，0.5μl Taq酶，1.8μl 2.5 mmol/L MgCl₂家，纯水调至20μl，放入PCR仪94℃预变性10 min，其后94 ℃变性45 s，56℃退火45 s，72℃延伸45 s，共35个循环，最后72℃延伸10 min，将产物贮存于4℃冰箱待用。

    1.4.4.5 PCR产物的检测取10μl PCR扩增产物于1.5%琼脂糖凝胶电泳(70 v，45 min)，完毕后置5μg/μl溴化乙锭(EB)染液染色10 min，采用凝胶成像和化学发光图像分析系统，测定电泳条带A值，以β-3aetin为内参照，计算COX-2、p38 MAPK条带A值与β-3aetin条带/A值的比值 ......