血管紧张素Ⅱ受体阻断剂对大鼠机械通气所致肺损伤的保护作用(2)
 |
一个酶活力单位。
(4)逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 肺组织中血管紧张素原(ANG)等基因表达水平的检测采用RT-PCR的方法，具体方法如下：①RNA的提取准确称取100 mg肺组织，匀浆后依次加入适当体积的Trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇进行RNA抽提，确定样品RNA的质量和纯度。②RNA逆转录抽取1 μg总RNA，严格按逆转录试剂盒所提供的方法合成cDNA。③PCR PCR反应体系包括：cDNA 4 μl，Buffer 5 μl，dNTP l μl，引物的正义链和反义链各1 μl，MgCl25 4 μl，Taq酶1 μl，加水至50 μl。内参采用管家基因磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)。PCR反应设定如下，先95℃预变性4～5 min，扩增30～35个循环，每个循环包括如下步骤：①变性94℃时30 s；②退火：55℃时30 s(GAPDH)，60℃时30 s(ANG)；③延伸72℃时45s，最后72℃延伸7～10 min，4℃终止反应。PCR产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系统采集图像，用图像分析软件(]magemaster)分析目的基因片段OD值。ANG特异引物为，正义链：5’CCTCGCTCTCTGGACTFATC 3’，反义链：5’CAGACACTGAGGTGC TGT TG 3’，目的基因片段长度为226 bp；GAPDH特异性的引物为，正义链：5’TGAAGGTCGGTGTCAACGGATITGGC 3’ ......
您现在查看是摘要页，全文长 5766 字符。