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编号:11514906
肾脏间质树突状细胞在多器官功能障碍综合征中的变化与作用(2)
http://www.100md.com 2007年11月1日 《中华急诊医学杂志》 2007年第11期
     1.2 透射电镜观察

    各组小鼠部分新鲜肾脏切成直径1 mm的组织块,立即置于3%的戊二醛溶液中,预固定24 h,OsO4后固定2 h,梯度乙醇及丙酮脱水,EPON 812包埋,超薄切片,醋酸铀-枸橼酸铅双染色,JEM-1200透射电镜观察。

    1.3 免疫荧光与免疫组化标记

    新鲜取材的肾脏立即用OTC包埋,恒冷切片机切成厚度5 μm切片,粘于APES胶片上,室温干燥30 min左右。4 ℃丙酮固定10 min PBS浸洗,5%BSA(牛血清白蛋白)封闭。免疫荧光标记:滴加美国仓鼠抗小鼠CD11c荧光抗体(1∶100,Biolend公司),室温避光孵育60 min PBS浸洗,甘油/PBS封片,立即在荧光显微镜下观察。免疫组化标记:滴加一抗,大鼠抗小鼠CD205(1∶25,Serotec公司),兔抗小鼠CD80(1∶200,博士德公司),小鼠抗小鼠I-Ab(1∶50,Scrotec公司) ......
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