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编号:12663221
补肾活血方对血管性认知障碍模型大鼠神经递质及其受体的影响(2)
http://www.100md.com 2014年4月1日 范雯 曾建伟 黄露芬 高丽萍 蔡晶
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     1.3 实验仪器 1200高效液相色谱仪,包括G1311A四元泵,G1316A柱温箱,G1329A自动进样器,G1329A荧光检测器和化学工作站(美国Agilent公司)。 CP225D电子天平(德国Sartorius公司),Milli-Q超纯水机(法国Millipore公司),100 μL圆头注射器。台式低温高速冷冻离心机(德国Hettich公司),超声波细胞破碎仪(美国Sonics公司)。

    1.4 分组及造模方法 Wistar大鼠40只,按体重随机分成4组:假手术组、模型组、银杏叶组、补肾活血方组,每组10只,雌雄各半。各组采用双颈总动脉永久结扎法(2-VO)造模,参照Eklof方法改良。具体步骤如下:大鼠造模前禁食(不禁水)1 h。以盐酸氯胺酮注射液0.3 mL/100 g体重剂量腹腔注射麻醉。将大鼠仰卧并固定在手术台上,颈部皮肤常规消毒。颈正中切口,仔细分离肌肉,分出双侧颈总动脉。埋线,用丝线结扎双侧颈总动脉。分层缝合肌肉及皮肤,硫酸庆大霉素注射液涂于皮肤切口以防感染。假手术组施行相同手术,但不结扎丝线。整个手术过程保持安静,室温控制在25.0 ℃±0.5 ℃。

    1.5 给药方法 按动物体表面积比率换算大鼠灌胃量,补肾活血方、银杏叶组分别灌胃补肾活血方煎剂、银杏叶片水溶剂10mL/kg。假手术组和模型组每天分别给予等体积的蒸馏水,连续灌胃15 d,2次/日。

    1.6 组织标本采集 末次给药后大鼠禁食不禁水12 h,以10%水合氯醛(300 mg/kg)腹腔麻醉。各组取4只大鼠,反正反射消失后,暴露心脏,用灌注针灌注生理盐水(4 ℃),至右心房流出的液体变清亮时,灌注多聚甲醛溶液(pH7.4)250 mL进行固定,以肝脏变白为灌注成功,快速断头取脑,迅速于冰盘上取大脑海马为主的脑组织 ......

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