血管生长素的差异表达对鉴别前列腺癌雄激素依赖性和非依赖性的临床意义的研究(2)
1.2细胞株和试剂
雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞、雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞均由中科院细胞库提供。LNCaP细胞在F12培养基(10%胎牛血清)中进行增殖培养传代，PC-3细胞在RPMI 1640培养基(10%胎牛血清)中进行增殖培养传代。培养时温度均为37℃，二氧化碳5%。
1.3方法
ANG在正常前列腺细胞和前列腺癌细胞系的表达：(1)人前列腺细胞系PC-3M和前列腺癌细胞系LNCaP购自中科院细胞库，按相关文献报道培养，LNCaP在激素递减环境下经连续传代形成激素非依赖的LNCaP-AI细胞系；(2)提取各组细胞总RNA，real-time PCR检测各组ANG mRNA含量；(3)提取细胞总蛋白，western-blot检测各组ANG蛋白含量。RNA干扰ANG合成后观察细胞生物学变化：(1)设计ANG靶向siRNA，以脂质体为载体转染LNCaP和LNCaP-AI细胞系，同时设计空白载体组；(2)稳定转染后，观察各组细胞形态变化；(3)用CCK-8法、自动酶标仪测定每孔的光密度(D)值比较转染前后各组细胞生长曲线变化；(4)以标准方法采用流式细胞仪检测转染前后各组细胞周期；(5)用Transwell小室和0.25% 考马斯亮蓝染色、正置显微镜进行计数观察转染前后各组细胞侵袭力 ......
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雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNCaP细胞、雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC-3细胞均由中科院细胞库提供。LNCaP细胞在F12培养基(10%胎牛血清)中进行增殖培养传代，PC-3细胞在RPMI 1640培养基(10%胎牛血清)中进行增殖培养传代。培养时温度均为37℃，二氧化碳5%。
1.3方法
ANG在正常前列腺细胞和前列腺癌细胞系的表达：(1)人前列腺细胞系PC-3M和前列腺癌细胞系LNCaP购自中科院细胞库，按相关文献报道培养，LNCaP在激素递减环境下经连续传代形成激素非依赖的LNCaP-AI细胞系；(2)提取各组细胞总RNA，real-time PCR检测各组ANG mRNA含量；(3)提取细胞总蛋白，western-blot检测各组ANG蛋白含量。RNA干扰ANG合成后观察细胞生物学变化：(1)设计ANG靶向siRNA，以脂质体为载体转染LNCaP和LNCaP-AI细胞系，同时设计空白载体组；(2)稳定转染后，观察各组细胞形态变化；(3)用CCK-8法、自动酶标仪测定每孔的光密度(D)值比较转染前后各组细胞生长曲线变化；(4)以标准方法采用流式细胞仪检测转染前后各组细胞周期；(5)用Transwell小室和0.25% 考马斯亮蓝染色、正置显微镜进行计数观察转染前后各组细胞侵袭力 ......
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