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编号:11546707
艾迪注射液促进人大肠癌细胞株HT-29凋亡的实验研究(2)
http://www.100md.com 2007年1月1日 《医药月刊》 2007年第1期
艾迪注射液促进人大肠癌细胞株HT-29凋亡的实验研究
艾迪注射液促进人大肠癌细胞株HT-29凋亡的实验研究

     1.2.3FITC-Annexin V/PI双染法细胞凋亡检测:基本操作步骤:⑴调整细胞浓度4×104个/ml,每培养瓶中加入5ml,培养24h后,弃掉培养基,加入高、中、低剂量的含药培养基培养72h。⑵将药物作用后的细胞先用胰酶消化,吹打均匀后,调整待测细胞的浓度为1×106/ml;⑶取1ml 细胞,1000rpm,4℃离心10 min,弃上清;⑷加入1ml 冷的PBS,轻轻震荡使细胞悬浮;⑸1000rpm,4℃离心10 min,弃上清;重复步骤3、4 两次;⑹将细胞重悬于200ul Binding Buffer;加入10ul ;⑺Annexin V-FITC,轻轻混匀,4℃反应30 分钟⑻加入5ul PI后加入300ul Binding Buffer,混匀后立即上机检测。

    结果判定:左上象限:细胞碎片;

    左下象限:活细胞;

    右上象限:凋亡晚期细胞和死细胞;
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    右下象限:凋亡早期细胞。

    1.3 统计学方法:original6.1、spss11.5

    1.4 实验结果:

    1.4.1 MTT检测结果:艾迪注射液各浓度对人大肠癌细胞株HT-29的增殖均有显著的抑制作用,且呈良好的量效关系(图1)。original6.1软件计算可知药物对大肠癌细胞株HT-29的IC50如为1:(18.633±0.525).根据此结果设定高、中、低剂量分别为:(1:10)、(1:20)、(1:40)。

    Fig.1The sensitive test of AIDI injection to human large intestinal cancer HT-29 cells (MTT)

    NoteThe x-axis represents the ratio of the diluted AIDI injection by the culture medium
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    The y­axis represents the quantity of alive cells

    1.4.2Annexin V/PI双染法细胞凋亡检测结果:

    注:△(与空白组比较P<0.05);△△(中剂量与低剂量比较P<0.05)

    结果显示:(1)空白组活细胞占89.21%;艾迪注射液低剂量组为77.98%;艾迪注射液中剂量组为52.35%;艾迪注射液高剂量组为43.14%。随着药物浓度的增加,活细胞数量逐渐减少,三者与空白组相比,差异显著(P<0.05=。(2)空白组凋亡早期细胞占0.67%;艾迪注射液低剂量组为16.55%;艾迪注射液中剂量组为31.88%;艾迪注射液高剂量组为40.77%。随着药物浓度的增加,凋亡细胞数量增大,三者与空白组相比,差异显著(P<0.05)。

    2 讨论
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    艾迪注射液的有效成分为黄芪、刺五加、人参和去甲斑鳌素。一方面能健脾和胃,补气养血,增强NK细胞活性,刺激T淋巴细胞产生干扰素、肿瘤坏死因子等淋巴因子,提高免疫功能,减轻化疗毒性[1 2 3];另一方面,斑蝥的抗癌活性成分为斑蝥素,斑蝥素对癌细胞有抑制作用[4], 能特异阻滞细胞周期,直接杀伤肿瘤细胞[5],斑蝥提取物可促进骨髓造血干细胞成熟、分化,促进边缘池粒细胞的释放[6]。本实验结果显示,艾迪注射液对人大肠癌细胞株HT-29有抑制作用,并随着药物浓度的增加其抑制作用增强。Annexin V/PI双染法细胞凋亡检测结果表明,艾迪注射液能促进大肠癌细胞株HT-29凋亡,同时随着剂量的增大,凋亡细胞的数量和比例都在增加,这表明艾迪注射液诱导大肠癌细胞HT-29凋亡和抑制其增殖呈正相关。

    参考文献

    [1] 马丁.黄芪刺五加对人卵巢癌抑制作用初步研究[J].肿瘤,1992, 2(2):51~55.
, 百拇医药
    [2] 叶红军,邹兵,杜意平.刺五加叶皂甙诱发肝癌细胞凋亡的研究.临床肝胆病杂志,2002,18(3):162~163.

    [3] Tatsuka M,Maeda M,Ota T.Anticarcinogenic effect and enhancement of metastatic potential of BALB/C 3T3 cells by ginsenoside Rb(2)[J].Jpn J cancer Res,2001,92:1184~1189

    [4] 孙震晓,魏育林,赵天德,等.斑蝥素及去甲斑蝥素诱导人红白血病K562细胞凋亡的细胞学研究.解剖学报,2000,31(1):56~60.

    [5] 唐龙英,王昭梅,郑钦岳,等.去甲斑蝥素对卵巢癌3AO和AO细胞的体外抑制作用[J].第二军医大学学报,1999,20:97~99.

    [6] 方茵.去甲斑蝥素去氧脱氢化物的合成与抗癌活性[J].药学学报,1993,28(12):931~933., http://www.100md.com(李 康)
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