天台乌药叶SOD活力测定研究(2)
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公式(3)中，Y1：100%硫酸铵饱和度盐析样品溶液，上层漂浮固体溶解、测定，由标准方程计算出的样品在反应系统的SOD活力(U)；Y2：100%硫酸铵饱和度盐析样品溶液，下层沉淀固体溶解、测定，由标准方程计算出的样品在反应系统的SOD活力(U)；0.1：加入系统样品溶液的体积(ml)；20：硫酸铵盐析后的固体被溶解后的体积(ml)；200：取初提取液的体积(ml)；300：初提取液的总体积(ml)；100：天台乌药叶样品的总量(g)。
2 结果与分析
2.1 PR自氧化抑制率对标准SOD系统总活力的回归方程
按表1依次向各管中加入试剂，空白对照管用等量10 mmol/LHCl代替PR。在同一试管中加完SOD后置25℃水浴保温10 min，然后取同一温度孵育的PR，立即在紫外可见分光光度计325 nm波长处测定，从加入邻苯三酚后开始计时，分别记录试管在120、150、180、210 s时的吸收值。根据“0”号试管结果，计算PR自氧化速率，结果见表2。根据公式(1)计算加入不同体积标准SOD溶液后的抑制率，见表3，从而计算得到抑制率Y对系统SOD活力X曲线方程为：Y=3.012 50X+2.119 33，R2=0.995 9。
2.2天台乌药叶SOD的活性测定
天台乌药叶SOD提取液(经“1.2.2”过程提取制备)替代标准SOD溶液，用以上方法测定天台乌药叶样品对PR自氧化的抑制率。其中，每一种样品单独设定与其相对应的浓度作为空白对照。根据公式(2)计算抑制率；利用SOD标准方程计算系统SOD活力，按公式(3)计算天台乌药叶样品SOD活性。具体数据结果见表4。
3 结论与讨论
3.1 结论
本文研究了5月份上午采摘的新鲜天台乌药叶，5月份下午采摘的新鲜天台乌药叶，冷藏12月份采摘的天台乌药叶，风干12月份采摘的天台乌药叶四种树叶SOD的活性，并设置了各自的空白对照组，比较活力大小。实验可知天台乌药叶中含有SOD，其中，冷藏12月份的采摘乌药叶中SOD的活力相对较高，含量为60.411 U/g；5月份采摘的新鲜乌药叶SOD含量相对较低，含量为44.943 U/g；老树叶的开发价值高于新鲜树叶；上午采摘和下午采摘的乌药叶SOD含量的差异不大；风干后保存的乌药叶中也含有SOD，且与冷藏树叶的差异不大。
3.2 讨论
由于乌药叶提取样品杂蛋白较多，系统的吸光度较大，从一定程度上影响了测定结果，所以测定时系统活力曲线的线性不够理想。提取、纯化和测定乌药叶SOD的方法，有待进一步完善。本文可为天台乌药叶SOD的深入研究开发提供参考。
本实验的依据是中华人民共和国国家标准GB/T 5009.171-2003《保健食品中超氧化物岐化酶(SOD)活性的测定》中规定的方法：修改的Marklund方法，并根据文献及实际条件对提取和计算方法进行了优化。
为提高提取率，用缓冲液提取时，可采用少量多次加入重复提取，以便提高提取率。
新鲜树叶与老树叶相比，新鲜树叶活力低于老树叶，开发价值为冷藏的12月份采摘的老树叶高于新鲜树叶，条件允许情况下，用新采摘的老树叶作为原料最佳。
与动物来源的SOD相比较，植物来源的SOD的提取率相对较低，因此暂时不宜于用作替代来源。但是开发植物来源的SOD保健产品仍然具有较好的前景，因为其具有独特的健康概念，而且原料简便易得，加工方便，成本较低。
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