应用荧光定量PCR检测肝细胞癌微小转移(2)
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表2 外周血AFP-mRNA检出率与临床参数的关系(例)
3 讨论
肝癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发病隐匿，预后差。目前手术切除仍然被认为是肝细胞肝癌最有效的治疗方法，但术后复发转移率甚高。血行播散是肿瘤转移的重要途径，检测外周血中的肿瘤细胞对判断有无血行播散具有重要意义。肝脏位于体循环与门静脉系统的交汇处，血供相当丰富，肝癌细胞在早期即可侵袭血管进入外周循环，肝癌的这一特点使在外周血中检测肝癌细胞成为可能。
TaqMan荧光定量RT-PCR是近年来发展起来的一项新技术[3,4]。其原理是在常规PCR扩增系统中加入一段与靶基因特异互补的荧光标记探针，该技术巧妙利用了PCR技术高效扩增、探针杂交的高特异性及光谱技术的高敏感性及定量分析等优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化，在PCR扩增过程中进行实时动态检测，克服了常规PCR由于平台效应带来的误差。该方法采用闭管检测，既有效防止了因扩增产物污染而导致的假阳性问题，又能够对标本起始模版精确定量，已逐步成为PCR更新换代的新技术,适用于肿瘤基因定量追踪监测[5]。本研究利用荧光定量RT-PCR检测HCC患者外周血中AFP-mRNA的表达。
本研究结果显示，肝细胞癌患者13例为阳性，阳性率为52%，12例为阴性，阴性率为48%。有明确肝外转移灶的病例血AFP-mRNA 阳性率为80%，无肝外转移灶的病例血AFP-mRNA 阳性率为33%，证实外周血AFP-mRNA是判断肝癌是否发生肝外转移的重要指标。Matsumura等[5]认为，肝细胞癌外周血AFP-mRNA阳性可作为血液循环中有肝癌细胞的标志。此外，随着分期越晚，AFP-mRNA阳性率显著增高，出现肝内外转移的可能性亦随之增大。而单个癌灶组与多个癌灶组血AFP-mRNA阳性率无显著性差异，说明这两组病例发生癌细胞血行转移的风险是相同的，即使是小肝癌也有血行播散的可能，且与肿瘤数目多少无关。Ⅰ～Ⅱ期组和肿块≤5 cm 组各有41%和40%的病例在外周血中检测出AFP-mRNA，提示在肝癌早期就已经有癌细胞从原发灶脱落播散入血，并可能成为复发或转移的根源。不同血清AFP 水平组血AFP-mRNA 阳性率并无显著性差异，说明外周血AFP-mRNA 是一个比血清AFP 更灵敏的指标。因此，联合检测外周血AFP-mRNA 和血清AFP 可能有助于提高血清AFP 阴性或弱阳性、影像学不典型的肝细胞癌的确诊率[6]。
[参考文献]
[1]Alle PS, Jamain WR. Current status of hepatic resection [J]. Adr Surg,2003,37(1):29-49.
[2]Wang YL, Li G, Wu D, et al. Analysis of alpha-fetoprotein mRNA level on the tumor cell hematogenous spread of patients with hepatocellular carcinoma undergoing orthotopic liver transplantation [J]. Transplant Proc,2007,39(1):166-168.
[3]Gibson UE, Heid CA, Williams PM ......
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