二氢杨梅素对肝纤维化大鼠脂质过氧化损伤的保护作用(2)
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参见附件(1997KB，3页)。
1.4 取材和标本处理
造模13周后，大鼠处死前禁食12 h，称重后经腹腔注射10%水合氯醛溶液麻醉并固定。在肝右叶取约0.5 g肝组织，在低温条件下剪碎，放入匀浆器中，再加入9倍体积的冷生理盐水，研磨成匀浆后，倒入离心管中，低温高速离心机3 000 r/min，离心15 min，取上清装入Eppendorf管中，保存于-20℃冰箱，按试剂盒说明书测定MDA的含量和SOD的活性。
1.5 统计学处理
数据以均数±标准差(x±s)表示，经SPSS 13.0软件处理，采用单因素方差分析，组间比较采用LSD-t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1大鼠肝脏病理学变化
造模结束时，模型组、复方鳖甲阳性对照组和二氢杨梅素低、中、高剂量组大鼠分别死亡5、2、3、4、2只，正常组无死亡。HE染色(图1)显示，正常组肝细胞结构完整，无变性、坏死；模型组可见肝细胞脂肪变性、水肿，肝索排列紊乱，汇管区及肝小叶内可见明显的炎性细胞浸润，纤维组织增生明显，形成假小叶，证明造模成功。Masson染色(图2)显示，正常组大鼠仅在汇管区见少量胶原纤维；模型组可见较粗的纤维间隔；复方鳖甲阳性对照组和二氢杨梅素各剂量组可见稍细的纤维间隔。
图1 肝组织的HE染色(×200)
(A：正常组；B：模型组；C：复方鳖甲阳性对照组；D：二氢杨梅素低剂量组；E：二氢杨梅素中剂量组；F：二氢杨梅素高剂量组)
2.2 二氢杨梅素对肝组织匀浆MDA含量和SOD活性的影响
与正常组比较，模型组大鼠肝组织中MDA含量明显升高，SOD活性明显下降，差异有统计学意义(P<0.01)；随着剂量的增大，二氢杨梅素低、中、高剂量组升高的MDA有不同程度的降低，降低的SOD有不同程度的升高，与模型组比较，差异有统计学意义(P<0.05)；复方鳖甲阳性对照组经复方鳖甲软肝片治疗后，与模型组比较，SOD活性明显升高，MDA明显降低，差异有统计学意义(P<0.05)；二氢杨梅素高剂量组与复方鳖甲阳性组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。
表1 各组大鼠肝组织匀浆MDA含量、SOD活性比较(x±s)
与正常组比较，#P<0.01；与模型组比较，*P<0.05
3讨论
肝纤维化是多种致病因素作用于肝细胞引起肝细胞变性、坏死后的共同病理基础，是肝脏纤维组织过度沉积的过程，表现为细胞外基质的合成大于降解[8]。CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型是研究肝纤维化的经典模型[9]。CCl4进入机体后，可直接溶解肝细胞膜，且在肝细胞内质网中经肝微粒体内依赖于细胞色素P450的混合功能氧化酶的代谢后，生成有活性的三氯甲基自由基和氯甲基自由基，它们与肝细胞内的大分子发生共价结合，也可攻击膜不饱和脂质，引发活性氧自由基的产生和脂质过氧化，损伤肝细胞，促使肝脏纤维化形成。MDA是氧自由基与细胞膜表面不饱和脂肪酸脂质过氧化反应的终末产物，SOD是细胞内天然的氧自由基清除剂。研究表明，肝纤维化的发生、发展与氧自由基损伤、脂质过氧化有关，肝组织中脂质过氧化产物MDA含量明显增加，SOD活性不同程度地降低[10-12]。本研究中，在采用CCl4诱导制备大鼠肝纤维化模型的同时，给予不同浓度的二氢杨梅素干预，从组织切片发现3个不同剂量组的大鼠肝脏纤维组织增生、脂肪变性、炎性细胞浸润均低于模型组，肝纤维化病理改变明显得到改善，说明二氢杨梅素对CCl4诱导的大鼠肝纤维化有较好的预防、保护作用。同时，随着剂量的增大，二氢杨梅素低、中、高剂量组升高的MDA有不同程度的降低，降低的SOD有不同程度的升高，说明二氢杨梅素能提高肝组织的抗氧化酶活性，抑制自由基的产生及其引起的脂质过氧化反应，并清除氧自由基，使大鼠肝纤维化程度减轻，提示抗脂质过氧化损伤作用可能是二氢杨梅素抗肝纤维化的作用机制之一，为进一步研究和开发藤茶提供基础。
[参考文献]
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[8]赵建学,陆玮婷,郭海燕,等.肝纤维化与细胞因子的研究新进展[J].中国医药导报,2008,5(4):19-21. ......
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