洁阴净洗剂的质量控制方法研究(2)
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参见附件(1760KB，3页)。
图 3 黄柏鉴别薄层色谱图
(1.供试品;2.黄柏对照药材;3.阴性对照)
Fig.1 TLC chromatogram of Cortex Phellodendri Chinensis
(1.Sample; 2.Cortex Phellodendri Chinensis reference drug; 3.Negative sample)
2.2 含量测定
2.2.1 HPLC色谱条件色谱柱为岛津Shim-pack VP-ODS柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈-0.5%冰醋酸(20∶80)溶液;流速为1.0 ml/min;检测波长为346 nm;柱温为25℃;进样量为20 μl(定量环)。
2.2.2 供试品溶液的制备精密吸取洁阴净洗剂2 ml,加甲醇溶解并定容于25 ml容量瓶中,摇匀,用0.45 μm微孔滤膜过滤,作为供试品溶液。
2.2.3 检测波长的确定用甲醇溶液配制盐酸小檗碱对照品溶液(约0.1 mg/ml),在6010-紫外分光光度计(惠普上分)上200～400 nm范围扫描,在346 nm波长处有最大吸收,故选之为检测波长。
2.2.4 对照品溶液的制备与线性关系考察精密称取盐酸小檗碱对照品4.8 mg,置25 ml容量瓶中,加入甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制成对照品储备液,分别精密吸取上述盐酸小檗碱对照品储备液0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml置10 ml容量瓶中,加甲醇溶液配制成浓度为3.84、9.60、19.20、28.80、38.40 μg/ml的对照品溶液,分别以20 μl进样,测得峰面积,得回归方程为A=25 482X+11 395,r=0.999 9,表明盐酸小檗碱在3.84～38.4 μg/ml浓度范围内线性关系良好。
2.2.5空白试验按处方比例和制法制成不含黄柏的样品,并按供试品溶液的制法制成空白对照溶液。依法进样测定,结果空白对照溶液在盐酸小檗碱保留时间处无色谱峰,表明在实验条件下,其他药材成分对测定无干扰,见图4。
图 4 洁阴净洗剂的高效液相色谱图
(A.盐酸小檗碱对照品; B.样品;C.阴性对照;1.盐酸小檗碱)
Fig.1 HPLC chromatogram of Jieyinjing Lotion
(A.Berberine hydrochloride reference; B.Sample; C.Negative sample; 1.Berberine hydrochloride)
2.2.6 稳定性试验取同一批号(批号为071128)的供试品溶液,按供试品溶液的制备方法,依上述色谱条件,于制备后0、1、2、3、4、8、10、24 h进行测定。结果样品溶液平均峰面积为415 003, RSD为1.11%(n=7),表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。
2.2.7 精密度试验取同一份供试品溶液,每次进样20 μl,重复进样6次,结果平均峰面积为415 433,RSD为1.18%(n=6),表明本法精密度良好。
2.2.8 重复性试验取同一批号(批号为071128)样品溶液,按供试品溶液的制备方法,依上述色谱条件测定,结果平均含量为197.89 μg/ml,RSD为1.00%(n=5),说明本法重现性良好。
2.2.9 加回收率试验精密吸取已知含量(含量分别为197.77、195.95、202.00 μg/ml)的样品各3份,共9份,每份1 ml,分别加入浓度为192.00 μg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液0.5、1.0、1.5 ml,混匀,按样品溶液制备项下操作制备供试液,分别进样,测定峰面积,计算结果见表1。
表 1 盐酸小檗碱加样回收率试验结果(n=9)
Tab.1 Determination results of recoveries(n=9)
2.2.10 样品测定取5批样品,分别精密量取2 ml,依法制成供试品溶液,分别以20 μl进样,测定吸收峰面积,以外标法计算盐酸小檗碱含量,结果见表2。
表 2 洁阴净洗剂中盐酸小檗碱含量测定结果(n=5)
Tab.2 Content determination results of berberine hydrohloride
in Jieyinjing Lotion(n=5)
3 讨论
在对制剂中的苦参进行TLC鉴别时,参照有关文献[6-7],其多次展开结果都曾出现斑点拖尾的现象,故在展开剂中适当增加碱性试剂的比例以防止拖尾,结果表明斑点较圆整、无拖尾现象。同时参考文献,采用改良的碘化铋钾试剂作为显色剂,但因其底色较深,不易显现出斑点的颜色,现采用碘-碘化钾试剂取代,斑点较清晰,底色也能渐褪去。
在百部的薄层鉴定中,其有效成分在碱性和酸性条件下均能在氯仿中提取出同一种物质,在供试品的色谱中,在样品(酸、碱)色谱图的相应位置上出现相同的橙红色斑点[8-9]。现利用这一特性对百部进行酸化后再提取,可避免一些在碱性环境中可以被氯仿提取,而在酸性环境中却不溶于氯仿的物质(如苦参)对实验的干扰。
在进行黄柏TLC鉴别中,参考相关文献[6]、[10],用水饱和的正丁醇提取时,所含杂质多,日光下检视不清楚,现改用浓氨试液调节氯仿进行提取,结果杂质较少利于检视,而展开剂属于酸性试剂,因此可先在提取液中加盐酸调为酸性,以利于展开。
洁阴净洗剂为复方制剂,方中干扰成分众多,样品的处理及流动相的选择都很重要。本文对HPLC分析时的流动相系统组成和比例作了比较,对多种溶剂系统进行选择,曾采用乙腈-0.5%冰醋酸溶液、甲醇-乙腈-0.02 mol/L磷酸水溶液,甲醇-不同浓度的磷酸溶液等系统 ......
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