金银忍冬多糖提取工艺研究
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[摘要] 目的:研究金银忍冬中多糖的最佳提取工艺。方法:采用正交试验确定各因素的影响大小,确定金银忍冬中多糖的最佳提取条件,用水提醇沉方法提取多糖,苯酚-浓硫酸法测定多糖含量。结果:温度对金银忍冬多糖提取影响作用最大,金银忍冬多糖的最佳提取工艺:温度为90℃;提取3 次, 3 h/次。结论:该研究可为金银忍冬多糖工业化提取提供理论依据。
[关键词] 金银忍冬;多糖;正交试验法;提取工艺
[中图分类号] R943[文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2010)06(a)-069-02
Study on extraction process ofPolysaccharide in Lonicera Maackii
HE Ying, ZHOU Wei, ZHANG Lianxue*
(College of Chinese Medicinal Materials, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)
[Abstract] Objective: To optimize the extraction process of polysaccharide in Lonicera Maackii. Methods: The content of polysaccharide was determined by water extracting-alcohol precipitateing and phenol-concentrated sulphuric acid. The influence of each factor was measured by orthogonal experiment. Results: The temperature had the greatest effect on the extraction of polysaccharide. The optimal condition was as follows: 90℃, and extraction 3 times (3 h each time). Conclusion: This study provides the theory basis for the industrial production.
[Key words] Lonicera Maackii; Polysaccharide; Orthogonal test; Extraction Process
金银忍冬(Lonicera Macckii Maxim.)为忍冬科忍冬属植物,又名金银木(山东)、王八骨头(吉林)等[1]。经研究发现,金银忍冬的绿原酸含量略高于金银花,且对于风热感冒和小儿肺炎都有较好的疗效[2-3]。可以考虑将其作为金银花的替代资源。
多糖具有广泛的生物活性,在医学和兽医临床上研究应用也较广泛,可作为免疫促进剂或调节剂。大量体内外实验及临床研究表明,多糖具有增强机体免疫功能、强心降压、降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种药理功效[4-6]。目前尚未见关于金银忍冬多糖的研究报道,因此,本实验采用正交试验优选了金银忍冬多糖的提取工艺。
1 仪器与试药
1.1 仪器
RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);KQ-250B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);SHB-BA95型循环水是多用真空泵(河南巩义市英峪予华仪器厂);DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱(上海精宏实验设备有限公司);HH-S.Z.W型数显电子恒温水浴锅(常州澳华仪器有限公司);UV-754紫外可见分光光度计(山东彩虹分析仪器有限公司);GL-21LM高速冷冻离心机(湖南星科科学仪器有限公司)。
1.2 试药
金银忍冬采自集安,经我校园艺学院郭太君教授鉴定为金银忍冬;乙醚(分析纯,北京化工厂);无水乙醇(分析纯,北京化工厂);苯酚(分析纯,北京化工厂);浓硫酸(分析纯,北京化工厂);葡萄糖(分析纯,北京化工厂)。
2 方法与结果
2.1 正交试验
按照预试验的提取工艺,经过多次单因素对比试验,将影响提取最重要的因素确定为水浸提温度、浸提时间、浸提次数3个因素,每个因素考察3个水平,见表1。以金银忍冬多糖的含量为考察指标,用L9(33)正交表安排试验。
表 1 正交试验因素与水平设计
Tab.2 orthogonal test factors and level design
2.2 标准曲线制备
精密称取105℃干燥恒重的无水葡萄糖10 mg,置于100 ml量瓶中,蒸馏水定容。分别精取0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0 ml于具塞试管中。以水做空白,分别加6%苯酚1.5 ml,浓硫酸7.5 ml,冷却,定容至10 ml,摇匀,冷却,在490 nm测定吸光度值。以浓度为横坐标,吸光度A值为纵坐标,代入回归方程Y=59.414 0X+0.001 4(r=0.999 0),结果表明多糖在1.037～10.03 μg/ml范围内呈良好的线性关系。
2.3 多糖的提取
取金银忍冬药材粉末(20目)9份,各20 g,加200 ml乙醚,脱脂,残渣挥尽乙醚,加200 ml蒸馏水,分别以规定时间,规定温度,规定提取次数进行提取。同种方法所得的滤液合并,浓缩至约50 ml,加无水乙醇至浓度为80%,静置过夜,离心(3 500 r/min)15 min,除去上清液,收集沉淀,干燥,既得金银忍冬粗多糖。
2.4 样品中多糖含量的测定 ......
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