RP-HPLC测定宫瘤消片中芍药苷的含量(2)
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2.4 标准曲线的制备
分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μl按正文色谱条件进行分析，测定峰面积，结果见表1、图2。以对照品进样量(μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，结果表明芍药苷进样量在0.2～1.0 μg范围内，呈良好的线性关系。回归方程为Y=1 050.2X+44.93(r=0.999 2)。
表 1 标准曲线测定结果
Tab.1 The result of standardized curve
2.5 稳定性试验
取本品(批号：050601)20片，研细，称取粉末1.163 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，分别在制备样品后的0、2、4、8，12 h进样测定，测得芍药苷峰面积的平均值为330.46，RSD为1.21%，结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.6 重复性试验
取本品(批号：050601)20片研细，称取5份，各1.163 g，精密称定，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，并进行测定，芍药苷的平均含量为0.486 7 mg/g，RSD为1.29%，结果表明本法重现性良好。
2.7 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品(批号：050601，含量：0.553 8 mg/g)5份，分别精密加入对照品溶液1 ml，浓度为0.1 mg/ml，按上述条件依法测定。结果见表2。本法平均回收率为99.26%，RSD=1.65%，表明回收率的重现性较好。
表 2 加样回收率试验结果
Tab.2 Results ofrecovery test
回收率＝(M测-M样)/加入量×100%
2.8 样品含量测定
按照质量标准正文含量测定项下芍药苷测定方法对10批中试及试生产成品的芍药苷含量进行了测定，每批平行测定2次，结果见表3。
3讨论
3.1 检测波长的选择
取芍药苷对照品甲醇溶液，以甲醇为空白，于200～400 nm波长处进行光谱扫描，由光谱图可见，对照品芍药苷在230 nm波长处有一特征吸收波长，故试验选择230 nm作为检测波长。
3.2 流动相的选择
本实验曾经试过乙腈-水、甲醇-水、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.1%磷酸溶液等不同的流动相系统，发现乙腈-0.1%磷酸溶液调pH值可获得较好峰形和适合的极性范围，最终确定流动相的比例为乙腈-0.1%磷酸溶液(15∶85)获得较好的分离，分离度均大于1.5，拖尾因子在0.95～1.05。
3.3 提取方法的选择
对于本品分别考察了甲醇、乙醇作为提取溶剂，结果显示以甲醇作为提取溶剂，芍药苷的含量较乙醇高，故试验选用甲醇作为提取溶剂；采用超声、回流不同提取方式，超声处理与加热回流相比，结果表明含量无显著性差异，故选择超声处理样品；对提取时间10、20、50 、60 min的处理，进行了对比结果显示超声20、50、60 min芍药苷含量没有明显的变化，为了节省时间，合理利用资源，试验选择超声提取时间为20 min。即提取方法为甲醇超声处理20 min。
[参考文献]
[1]张丽华,孙红霞,李洪宇,等.宫瘤消片质量标准研究[J].中成药,2007,29(7):20-21.
[2]吴少华,马云保,罗晓东,等.丹皮的化学成分研究[J].中草药,2002,33(8):679-680 ......
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