不同居属地半夏核苷类有效成分的比较研究(2)
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2.4系统适应性试验
色谱条件的选择：以乙腈-水系统为流动相进行色谱分析，流动相为乙腈-水(0.1∶99.9)，25 min后以高浓度有机溶剂洗脱；测定波长：综合五种化合物的紫外光谱，将其测定波长确定在254 nm；柱温：30℃；流速：0.8 ml/min。
2.5 方法学考察
2.5.1 线性关系考察 取上述各不同鸟苷浓度的混合对照品溶液，每个浓度进样2次，记录鸟苷对应的保留时间处的峰面积。以对照品浓度对平均峰面积值进行回归，得到回归方程为A=5.730 2×107C-52 961(r=0.999 4)，可见鸟苷在0.928～24.734 g/ml 范围内线性关系良好，见图1。
图 1 标准曲线测定结果
Fig.1The result of standardized curve
2.5.2 精密度试验 取4号混合对照品溶液连续进样6次，以鸟苷为指标进行精密度考察试验，得出RSD=0.07%，符合要求。
2.5.3 稳定性试验 取上述半夏供试品溶液，隔2 h测1次，共测6次。结果表明，供试液中鸟苷在10 h内稳定，RSD为1.35%，符合要求。
2.5.4 重复性试验 取重庆半夏样品粉末，平行处理6份，依法测定鸟苷含量，得出鸟苷含量RSD为2.40%，重复性良好。
2.5.5 回收率试验 精密称取重庆半夏粉末共6份，各0.5 g，精密称定，置50 ml具塞三角瓶中，分别加入对照品溶液稀释液1 ml，再分别加入水至10 ml，与供试品溶液同法提取检测。计算鸟苷的回收率为102.74%，RSD为 2.91%，符合要求。
2.6 不同居群半夏中核苷的含量测定(以鸟苷计)
取上述供试品溶液进样，每份进样1次，进样量20 μl。取峰面积计算鸟苷含量，对照品溶液随行对照。在检测波长254 nm下，得出半夏对照品溶液和供试品溶液(以重庆半夏为例)的HPLC图，分别以图2、3。图谱中peak1、peak2、peak3、peak4、peak5分别代表尿嘧啶、黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤核苷、鸟嘌呤核苷的保留值。图3表明重庆半夏中5种核苷类成分均含有，而计算时则以鸟嘌呤核苷计。
2.7 结果
实验原始数据(表1)表明，虽然由于操作失误等原因，个别产地的个别编号未测出某些核苷类成分，但总体看，用于本次实验的各个批次半夏均含有尿嘧啶、黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤核苷、鸟苷等5种核苷类成分。
鸟苷含量计算方法：将各批次各编号半夏供试品溶液得出的鸟苷峰面积A代入标准曲线，即得鸟苷浓度C(mg/ml)。鸟苷含量=C×10/(W×1 000)×100%。不同批次鸟苷含量比较，见表1。
由上表得出，不同居群半夏中的核苷类成分含量存在显著性差异，以鸟苷计，江苏泰半夏核苷类成分含量最高，重庆半夏略低，两者均达到了0.05%，而以湖北荆半夏最低，总体为0.016 1%～0.058 4%。
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