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编号:12647568
两种大鼠皮瓣缺血再灌注损伤模型的比较(2)
http://www.100md.com 2014年8月5日 中国医药导报2014年第22期
     1.5 HE染色观察

    于皮瓣蒂部的近端部位取1 cm2大小组织块,中性福尔马林缓冲液固定,石蜡包埋,制作切片,脱蜡水化,苏木精(中杉金桥,5 mL)5 min,1%盐酸酒精分化,伊红(中杉金桥,100 mL)5 min,自来水返蓝10 min,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封片,镜检。观察皮肤的组织学变化。

    1.6 凋亡检测

    末端脱氧核苷酸转移酶介导的d-UTP缺口末端标记技术(TUNEL)标记凋亡细胞:皮瓣组织切片脱蜡水化,置细胞通透液室温8 min,加入TUNEL反应混合液(Roche,Switzerland,50Tests),37℃孵育1 h,磷酸盐缓冲液(PBS)清洗,加入Converter-POD,37℃孵育30 min,PBS清洗,DAB(中杉金桥,10 mL)染色,苏木精复染,封片镜检。在病变典型处连续计数5个高倍视野(400×),每视野记数300个细胞中阳性细胞数,计数凋亡细胞数目及总细胞数目,以阳性细胞数所占总细胞数的百分比作为凋亡细胞阳性指数(AI),AI=(凋亡细胞数目/总细胞数目)×100% ......
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