羟基红花黄色素A对胶质瘤U251细胞增殖、迁移与侵袭的影响(2)
1.4 Transwell试剂盒检测U251细胞的侵袭能力
采用Transwell小室法构建侵袭模型，用无血清MEM将U251细胞浓度调整至5×105个/mL，取0.25 mL加入Transwell上室，同时进行药物干预(HSYA 100 mmol/L，阳性对照组替莫唑胺100 mmol/L)，下室中加入0.5 mL含有10%胎牛血清的MEM。置细胞培养箱培养72 h后取出小室并弃去小室内液体，将小室置入0.1%结晶紫染色液中染色20 min，纯净水清洗后以棉签拭去小室滤膜上表面的细胞，干燥后使用200 μL醋酸脱色液脱色15 min，取100 μL至96孔板检测560 nm的OD值。
1.5 Western blot检测MMP-2、MMP-9的蛋白表达
U251细胞经HSYA处理后，裂解细胞提取细胞总蛋白，BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。取30 μg蛋白质行10% SDS-PAGE电泳分离蛋白，电转膜后5%脱脂奶粉封闭1 h，加入兔抗人MMP-2、MMP-9单抗(Cell signaling公司 ......
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采用Transwell小室法构建侵袭模型，用无血清MEM将U251细胞浓度调整至5×105个/mL，取0.25 mL加入Transwell上室，同时进行药物干预(HSYA 100 mmol/L，阳性对照组替莫唑胺100 mmol/L)，下室中加入0.5 mL含有10%胎牛血清的MEM。置细胞培养箱培养72 h后取出小室并弃去小室内液体，将小室置入0.1%结晶紫染色液中染色20 min，纯净水清洗后以棉签拭去小室滤膜上表面的细胞，干燥后使用200 μL醋酸脱色液脱色15 min，取100 μL至96孔板检测560 nm的OD值。
1.5 Western blot检测MMP-2、MMP-9的蛋白表达
U251细胞经HSYA处理后，裂解细胞提取细胞总蛋白，BCA蛋白测定试剂盒测定蛋白浓度。取30 μg蛋白质行10% SDS-PAGE电泳分离蛋白，电转膜后5%脱脂奶粉封闭1 h，加入兔抗人MMP-2、MMP-9单抗(Cell signaling公司 ......
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