禽流感抗原基因NA,HA的克隆及其表达载体的构建
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李进 阮颖 龚剑 范亚丽 姚远頲 杜培粉 魏然 刘春林 湖南农业大学生物科学技术学院 湖南农业大学生物科学技术学院 中国科学院病毒生物所 湖南农业大学生物科学技术学院 湖南农业大学生物科学技术学院 湖南农业大学生物科学技术学院 湖南农业大学作物基因工程湖南省重点实验室 湖南农业大学作物基因工程湖南省重点实验室
【摘要】HA和NA是禽流感病毒重要的保护性抗原基因,为了得到禽流感植物疫苗,本试验采用高保真PCR扩增方法得到目的基因,分别克隆到pMD18-T载体。经测序证实核酸序列正确后,克隆到含有GUS基因的高效植物双元表达载体pBl121上,获得含有HA/NA基因的植物双元表达载体pBI121-HA和pBI121-NA,采用冻融法将含HA/NA基因的植物双元表达载体转入根癌农杆菌LBA4404,菌液浸染生菜子叶,共培48小时后进行GUS基因表达检测,x-glue染色显蓝色,说明带有HA/NA的植物双元表达载体构建成功,为下一步的生菜转HA/NA基因研究奠定基础。
【关键词】 禽流感抗原基因NA HA 植物高效表达载体 禽流感
【基金】湖南省自然科学基金项目(20050203)
【分类号】S852.5;Q943.2
利用转基因植物生产研制基因工程药物是当今植物基因工程研究的一大热点,据报道已有多种编码病毒蛋白、细菌毒素和抗体分子等蛋白在转基因植物中表达II]。与细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞、转基因动物等表达系统相比,用转基因植物表达外源基因具有独特的优势I2]。自Ma
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摘要:HA和NA 是禽流感病毒重要的保护性抗原基因,为了得到禽流感植物疫苗,本试验采用高保真PCR扩增方法得到目的基因,分别克隆到pMD18-T 载体。经测序证实核酸序列正确后,克隆到含有GUS基因的高效植物双元表达载体pBI121 上,获得含有HA/NA 基因的植物双元表达载体pBI121-HA 和pBI121-NA,采用冻融法将含HA/NA 基因的植物双元表达载体转入根癌农杆菌LBA4404,菌液浸染生菜子叶,共培48 小时后进行GUS 基因表达检测,x-gluc 染色显蓝色,说明带有HA/NA的植物双元表达载体构建成功,为下一步的生菜转HA/NA基因研究奠定基础。
关键词:禽流感抗原基因NA,HA;植物高效表达载体;禽流感
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