人源抗体筛选和表达载体的构建
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张福强 王斗斗 宿晓云 马杰 吉林大学药学院 吉林大学药学院 吉林大学药学院 吉林大学药学院
【摘要】目的:构建一个可供抗体CDR(决定簇互补区)进行自由替换、筛选、表达的通用载体,并对其生物学功能进行鉴定。方法:在已构建好的具有Fc段的完全人源抗狂犬病病毒抗体表达载体基础上,利用PCR介导的定点突变技术,引入2个可供CDR3区进行自由替换的限制性酶切位点,构建出通用表达载体。体外合成人源、鼠源抗乳腺癌Her2抗体的CDR3区,克隆至已构建的通用载体,在毕赤酵母中诱导表达。应用ELISA和Western Blotting技术对亲本抗体和新抗体进行生物学及免疫学分析。结果:PCR、Western Blotting等试验表明具有Her2抗原结合活性的人源和鼠源突变型抗体获得成功表达,通过对表达产物的免疫学及功能学检测证明所表达出的抗体具有抗原中和活性,而且鼠源抗体的活性要稍高于人源抗体。结论:成功构建了可用于功能性抗体筛选和表达的通用载体,对抗体的体外亲和力成熟及抗体的人源化有重要意义。
【关键词】 通用载体 CDR 筛选 表达 功能性抗体
【基金】吉林省再生医学重点实验室资助项目
【分类号】R392;Q78
前言用DNA重组技术改善抗体的性能始于80年代初，其目的是去除抗体中某些不利的性能或引人某些特定的生物学性能，如用人源序列取代鼠源序列进行人源化、去除抗体分子中的某些片段构建小分子抗体、将具有特定生物学活性的基因与抗体基因拼接构建抗体融合蛋白等。但所有这些技
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摘要目的：构建一个可供抗体CDR(决定簇互补区)进行自由替换、筛选、表达的通用载体，并对其生物学功能进行鉴定。方法：在已构建好的具有Fc 段的完全人源抗狂犬病病毒抗体表达载体基础上，利用PCR介导的定点突变技术，引入2 个可供CDR3 区进行自由替换的限制性酶切位点，构建出通用表达载体。体外合成人源、鼠源抗乳腺癌Her2 抗体的CDR3 区，克隆至已构建的通用载体，在毕赤酵母中诱导表达。应用ELISA 和Western Blotting技术对亲本抗体和新抗体进行生物学及免疫学分析。结果：PCR、Western Blotting等试验表明具有Her2 抗原结合活性的人源和鼠源突变型抗体获得成功表达，通过对表达产物的免疫学及功能学检测证明所表达出的抗体具有抗原中和活性，而且鼠源抗体的活性要稍高于人源抗体。结论：成功构建了可用于功能性抗体筛选和表达的通用载体，对抗体的体外亲和力成熟及抗体的人源化有重要意义。
关键词：通用载体；CDR3；筛选；表达；功能性抗体
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