小鼠破骨细胞诱导及成纤维生长因子受体表达检测
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鲁秀敏 陈锚锚 苏楠 李福兵 赵玲 段亚琪 陈林 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室
【摘要】目的:检测成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptors,FGFRs)在小鼠破骨细胞中的表达情况,为探讨FGFRs对破骨细胞的直接调控作用奠定基础。方法:采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)和破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor-Bligand,RANKL)诱导小鼠骨髓单核细胞分化为破骨细胞。提取细胞总RNA后经逆转录获得小鼠破骨细胞cDNA,根据FGFRs基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增并对PCR扩增产物进行测序。为进一步验证转录水平的结果,提取细胞总蛋白电泳后进行免疫印迹实验。结果:诱导5d后可见TRAP(+)多核细胞出现,小鼠破骨细胞在转录水平和翻译水平均只可检测到FGFR1和FGFR3基因的表达产物。结论:M-CSF和RANKL可成功诱导出小鼠破骨细胞,FGFR1和FGFR3基因在小鼠破骨细胞中均有表达。
【关键词】 破骨细胞 成纤维生长因子受体 RT-PCR Western blot
【基金】国家重点基础研究发展规划资助项目(“973”项目)(2005CB522604) 国家自然科学基金杰出青年基金(30425023) 国家自然科学基金重点(30530410)
【分类号】R346
前言破骨细胞是由来自骨髓单核一巨噬细胞系的单核前体细胞融合而成,是体内高度特异性的惟一具有骨质吸收功能的多核巨细胞,它主要受骨髓基质细胞或成骨细胞分泌的破骨细胞分化因子(ree叩tor activator ofnuelearfaetor一Bligand,RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(maeroPhagee
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摘要目的:检测成纤维生长因子受体(fibroblast growth factor receptors, FGFRs)在小鼠破骨细胞中的表达情况,为探讨FGFRs 对破骨细胞的直接调控作用奠定基础。方法:采用巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony stimulating factor,M-CSF)和破骨细胞分化因子(receptor activator of nuclear factor- B ligand,RANKL)诱导小鼠骨髓单核细胞分化为破骨细胞。提取细胞总RNA 后经逆转录获得小鼠破骨细胞cDNA,根据FGFRs基因编码区序列设计的引物进行PCR扩增并对PCR扩增产物进行测序。为进一步验证转录水平的结果,提取细胞总蛋白电泳后进行免疫印迹实验。结果:诱导5d 后可见TRAP(+)多核细胞出现,小鼠破骨细胞在转录水平和翻译水平均只可检测到FGFR1 和FGFR3 基因的表达产物。结论:M-CSF 和RANKL可成功诱导出小鼠破骨细胞,FGFR1 和FGFR3 基因在小鼠破骨细胞中均有表达。
关键词: 破骨细胞;成纤维生长因子受体;RT-PCR;Western blot
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