siRNA抑制c-myc基因的表达对宫颈癌细胞增殖的影响
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张晓 葛银林 侯琳 薛美兰 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室 青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室
【摘要】目的:利用siRNA(small interference RNA)技术研究c-myc基因的对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法:依据Promega公司在网上提供的设计软件,设计针对c-myc基因的siRNA,合成DNA模板,体外转录合成siRNA。通过阳离子聚合物jet- SITM-ENDO将合成的siRNA转染入HeLa细胞,以未转染细胞以及错义序列siRNA-scr转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA对HeLa细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期及蛋白表达的变化,RT-PCR法比较转染前后c-myc mRNA表达水平的变化。结果:细胞计数法结果显示,转染24 h后c-myc基因siRNA明显抑制MCF-7细胞增殖,转染48 h后,抑制效率稳定。c-myc基因siRNA转染后能有效地抑制HeLa细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期,siRNA转染组c-myc mRNA、蛋白的表达量明显低于空白对照组、错义序列组。结论:体外转录合成的siRNA可有效降低HeLa细胞c-myc基因的表达,抑制细胞增殖。
【关键词】 siRNA 基因 c-myc HeLa细胞
【基金】青岛市科技局科技计划项目(03-1-YN-14)
【分类号】R737.33
前言与反义寡核昔酸、核酶等基因封闭技术相比，RNA干扰(RNA interference，RNAi)具有高效和高度特异性等特点，将外源性或内源性双链RNA(dsRNA)导人细胞后，可引起与该段RNA同源的mRNA产生特异性降解，其相应的基因也受到抑制，这种发生在转录后的基因静寂(post transeriptio
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摘要目的：利用siRNA(small interference RNA)技术研究c-myc 基因的对宫颈癌HeLa 细胞增殖的影响。方法：依据Promega 公司在网上提供的设计软件，设计针对c-myc 基因的siRNA，合成DNA 模板，体外转录合成siRNA。通过阳离子聚合物jet-SITM-ENDO 将合成的siRNA转染入HeLa 细胞，以未转染细胞以及错义序列siRNA-scr 转染细胞为对照。用细胞计数法检测siRNA 对HeLa 细胞增殖的影响。流式细胞法检测细胞周期及蛋白表达的变化，RT-PCR 法比较转染前后c-myc mRNA 表达水平的变化。结果：细胞计数法结果显示，转染24 h后c-myc 基因siRNA明显抑制MCF-7 细胞增殖，转染48 h 后，抑制效率稳定。c-myc 基因siRNA 转染后能有效地抑制HeLa 细胞的增殖，阻滞细胞周期于G0/G1 期，siRNA 转染组c-myc mRNA、蛋白的表达量明显低于空白对照组、错义序列组。结论：体外转录合成的siRNA 可有效降低HeLa 细胞c-myc 基因的表达，抑制细胞增殖。
关键词：siRNA；基因；c-myc；HeLa 细胞
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