从七肽噬菌体展示库中筛选内毒素结合蛋白质配基
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杨海捷 段光杰 朱崇涛 余德文 刘友生 成都军区昆明总医院 第三军医大学西南医院病理研究所 成都军区昆明总医院 成都军区昆明总医院 第三军医大学西南医院病理研究所
【摘要】目的:研究从噬菌体展示库中筛选内毒素结合蛋白质配基,为其在内毒素致病作用机理及在内毒素血症防治研究中的应用奠定基础。方法:以内毒素为靶分子从随机七肽噬菌体展示库中筛选内毒素的高亲和力噬菌体配体,通过ELISA鉴定,DNA测序及相关软件分析。结果:所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405 nm可达1.965通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA序列,认为FHENWPS肽段中包含有与内毒素分子发生亲和结合的一个共有序列。该序列展示肽的等电点为5.36,具有双嗜性,这有利于肽与LPS分子表面的位点相互作用从而产生亲和吸附。结论:运用亲和筛选方法从肽库中筛选内毒素结合蛋白质配基是可行的。
【关键词】 噬菌体展示肽库 内毒素 多肽 配基 亲和
【基金】国家自然科学基金(No.30700289)
【分类号】R346
前言生物大分子能够区分不同结构和性质的其他分子并选择性地与其中某一种分子相特异地结合，称为生物亲和作用，应用这一原理发展而来的亲和筛选技术是迄今分离鉴定蛋白质等生物大分子物质的最为有效的方法之一。在亲和技术中，与靶物质特异结合的分子称为配基。寻找和内毒素
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摘要目的:研究从噬菌体展示库中筛选内毒素结合蛋白质配基，为其在内毒素致病作用机理及在内毒素血症防治研究中的应用奠定基础。方法:以内毒素为靶分子从随机七肽噬菌体展示库中筛选内毒素的高亲和力噬菌体配体，通过ELISA鉴定，DNA测序及相关软件分析。结果:所筛选的亲和力最高的噬菌体的ELISA检测值A405 nm 可达1.965 通过比较亲和性噬菌体外源插入肽的DNA 序列，认为FHENWPS 肽段中包含有与内毒素分子发生亲和结合的一个共有序列。该序列展示肽的等电点为5.36，具有双嗜性，这有利于肽与LPS分子表面的位点相互作用从而产生亲和吸附。结论:运用亲和筛选方法从肽库中筛选内毒素结合蛋白质配基是可行的。
关键词：噬菌体展示肽库；内毒素；多肽；配基；亲和
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