应用xMAP液态芯片多重快速检测四种病原微生物的研究
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胡瑞 赵金银 陈德坤 刘艳华 高姗 康琳 高艳丽 王景林 西北农林科技大学动物医学院;军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室;
【摘要】目的:建立一种多重、快速、特异性好、灵敏度高的病原微生物检测方法。方法:根据GenBank数据库中的小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生性李斯特菌、产气荚膜梭菌、鼠疫耶尔森氏菌基因序列,分别针对ail、hly、cpe、3a基因设计4对引物和4条探针。通过重叠PCR扩增各目的基因并构建重组质粒,以该重组质粒DNA为模板,通过多重PCR同时扩增上述4个基因,建立xMAP液态芯片检测技术,在此基础上对标准菌株基因组DNA进行检测并验证该方法的特异性和敏感性。结果:xMAP液态芯片对质粒DNA和标准菌株基因组DNA的检测结果与多重PCR结果一致。该方法能在3.5 h内同时完成对4种病原菌的检测,特异性好,且敏感性要高于PCR方法,灵敏度最高可达200CFU/ml。结论:xMAP液态芯片技术是病原微生物的多重快速检测的新方法,具有很好的应用价值和前景。
【关键词】 xMAP液态芯片 病原微生物 检测
【基金】国家“863”计划资助项目(2006AA06Z414) 国家自然科学基金资助项目(30671824)
【分类号】R450
前言近年来，由病原微生物及其毒素引起的食源性疾病(foed- bomo diseases)作为一项重要的公共卫生问题已越来越受到世界各国的重视和关注。小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersin讯ente- roeolitiea)、产气荚膜梭菌(Clostridium pe而ngens)、单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monoeyt
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摘要 目的：建立一种多重、快速、特异性好、灵敏度高的病原微生物检测方法。方法：根据GenBank数据库中的小肠结肠炎耶尔森氏菌、单核细胞增生性李斯特菌、产气荚膜梭菌、鼠疫耶尔森氏菌基因序列，分别针对ail、hly、cpe、3a基因设计4对引物和4条探针。通过重叠PCR扩增各目的基因并构建重组质粒，以该重组质粒DNA为模板，通过多重PCR同时扩增上述4个基因，建立xMAP液态芯片检测技术，在此基础上对标准菌株基因组DNA进行检测并验证该方法的特异性和敏感性。结果：xMAP液态芯片对质粒DNA和标准菌株基因组DNA的检测结果与多重PCR结果一致。该方法能在3.5h内同时完成对4种病原菌的检测，特异性好，且敏感性要高于PCR方法，灵敏度最高可达200CFU/ml。结论：xMAP液态芯片技术是病原微生物的多重快速检测的新方法，具有很好的应用价值和前景。
关键词：xMAP液态芯片；病原微生物；检测
中图分类号：Q93-331 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2008)12-2232-04
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