一种改良的逼尿肌急性分离方法及离子通道电流检测
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文前军 朱崇涛 季惠翔 鄢俊安 李新 卢根生 李为兵 周占松 熊恩庆 宋波 第三军医大学西南医院泌尿外科;成都军区昆明总医院骨科;
【摘要】目的:建立一种稳定的适合膜片钳技术的逼尿肌细胞急性酶分离方法,为排尿相关障碍性疾病的研究提供必要的技术平台。方法:采用H型胶原酶和木瓜蛋白酶相混合的鸡尾酒酶液对新鲜离体的大鼠膀胱逼尿肌条在37℃条件下振荡消化,α-actin免疫荧光染色对分离并培养的原代细胞进行鉴定,在膜片钳工作台上分别对其进行L型钙电流和BKca钾电流的全细胞记录。结果:可获得大量的单个逼尿肌细胞。经过免疫荧光染色证实为平滑肌细胞。分离细胞活性良好,在膜片钳实验系统上可记录到多种通道电流。结论:建立了一种操作简单、成功率高、活性好的逼尿肌细胞急性酶分离方法并成功应用于膜片钳技术。
【关键词】 急性分离 膜片钳 逼尿肌 离子通道
【基金】国家自然科学基金项目(30471740、30672093、30772161)
【分类号】R694
前言近年来,以尿频、尿急或尿失禁等症状为主要临床表现的膀胱功能障碍性疾病的发病率呈现上升趋势[1]。遗憾的是,目前临床上尚无对此类疾病满意的治疗方法[2],提示相关的基础研究亟待加强。现有的证据表明膀胱逼尿肌自身的功能异常在这一类疾病发病机理中起着重要作用[3]。
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摘要 目的：建立一种稳定的适合膜片钳技术的逼尿肌细胞急性酶分离方法，为排尿相关障碍性疾病的研究提供必要的技术平台。方法：采用H型胶原酶和木瓜蛋白酶相混合的鸡尾酒酶液对新鲜离体的大鼠膀胱逼尿肌条在37℃条件下振荡消化，α-actin免疫荧光染色对分离并培养的原代细胞进行鉴定，在膜片钳工作台上分别对其进行L型钙电流和BKca钾电流的全细胞记录。结果：可获得大量的单个逼尿肌细胞。经过免疫荧光染色证实为平滑肌细胞。分离细胞活性良好，在膜片钳实验系统上可记录到多种通道电流。结论：建立了一种操作简单、成功率高、活性好的逼尿肌细胞急性酶分离方法并成功应用于膜片钳技术。
关键词：急性分离；膜片钳；逼尿肌；离子通道
中图分类号：R694 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)10-1812-04
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