嗜酸氧化亚铁硫杆菌硫氰酸酶的表达、纯化及其性质鉴定
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戴云杰 郑春丽 谭建锡 金德才 吴安娜 柳建设 中南大学资源加工与生物工程学院;东华大学环境科学与工程学院;
【摘要】目的:嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)硫氰酸酶是硫代谢中极其重要的酶,其作用主要包括氰化物的解毒,铁-硫蛋白的合成,以及硫胺、硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成,硫氰酸酶的研究对揭示生物冶金机理具有重要的推动作用。方法:以A.ferrooxidans ATCC23270基因组为模板设计引物,通过PCR扩增得到编码硫氰酸酶的基因,目的基因片段与原核表达载体PLM1构建重组体,然后转入大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)DH5a感受态中,基因测序正确后,重组质粒再转入E.coliBL21感受态中,加IPTG诱导蛋白表达,用一步亲和层析法纯化出浓度和纯度都较高的硫氰酸酶。结果:SDS-PAGE分析证实蛋白分子量为21kD,紫外可见光分析,确定硫氰酸酶中含有铁硫簇,酶活测定发现重组硫氰酸酶在体外不具有酶活性,可能与酶反应条件及信号肽的切断有关。结论:体外成功克隆,表达,纯化出重组体硫氰酸酶,其基本性质也得到阐述。
【关键词】 嗜酸氧化亚铁硫杆菌 硫氰酸酶 铁硫簇 表达 纯化
【基金】国家"973"基金资助项目(2004CB619204) 国家自然科学创新群体基金资助项目(50621063) 全国博士学位论文作者专项资金资助项目(200549) 国家自然科学基金项目(50874032)
【分类号】Q814
前言嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Acidithiobacillus ferrooxidans)是典型的化能自养菌,属于革兰氏阴性细菌,好氧嗜酸,由于能生长在元素硫和硫化物矿物上,因而成为生物湿法冶金中最有应用价值的一个种。目前已有不少国家应用它提取铜、铀、金等已获得工业生产,另外在煤脱硫、混合精矿
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摘要目的：嗜酸氧化亚铁硫杆菌(Ac|dithiobacillus ferrooxidans)硫氰酸酶是硫代谢中极其重要的酶，其作用主要包括氰化物的解毒，铁，硫蛋白的合成，以及硫胺、硫尿苷或烟碱乙酸胆碱的生物合成，硫氰酸酶的研究对揭示生物冶金机理具有重要的推动作用。
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