以人皮肤成纤维细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞
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杨俊林 刘雄昊 喻姣玲 冯劢 谭杨 李卓 吴奔 高庭 潘盛 邬玲仟 梁德生 夏家 中南大学医学遗传学国家重点实验室;
【摘要】目的:比较人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDFs)与小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts,MEFs)的增殖能力及研究人皮肤成纤维细胞作为饲养层支持人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hESCs)未分化生长的能力。方法:利用组织贴壁法从人皮肤中分离出HDFs,通过细胞形态的观察和生长曲线的绘制比较HDFs与MEFs的体外增殖能力。将HDFs作为饲养层细胞与hESCs共培养,传代12代后,检测hESCs碱性磷酸酶(AKP)、表面特异性标志及胚胎干细胞特异性转录因子。结果:HDFs可连续传代培养15代以上,10代以下的HDFs增殖迅速,而MEFs自第4代起,增殖能力就明显下降;hESCs在HDFs饲养层上可传代培养12代以上,克隆边界清晰,细胞排列紧密,碱性磷酸酶、表面标志物检测均呈阳性,表达了hESCs特异性转录因子。结论:HDFs比MEFs具有更强的增殖能力;HDFs可作为培养hESCs的饲养层细胞。
【关键词】 人胚胎干细胞 人皮肤成纤维细胞 饲养层细胞
【基金】国家重点基础研究发展计划(2004CB518800) 国家高技术研究发展计划(2007AA021002和2007AA021206) 国家自然科学基金(30700458和30971298)
【分类号】R329.2
前言自1998年Thomson[1]等人建立第一株人胚胎干细胞(hu-man embryonic stem cells,hESCs)细胞系以来,hESCs迅速成为人干细胞领域的研究热点。hESCs是具有自我更新和多向分化潜能的多能干细胞,可以定向分化成不同的细胞、组织,这使得hESCs在细胞治疗以及再生医学方面具有巨大
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摘要目的：比较人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts，HDFs)与小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblasts，MEFs)的增殖能力及研究人皮肤成纤维细胞作为饲养层支持人胚胎干细胞(human embryonic stem cells，hESCs)未分化生长的能力。方法：利用组织贴壁法从人皮肤中分离出HDFs，通过细胞形态的观察和生长曲线的绘制比较HDFs与MEFs的体外增殖能力。将HDFs作为饲养层细胞与hESCs共培养。传代12代后，检测hESCs碱性磷酸酶(AKP)、表面特异性标志及胚胎干细胞特异性转录因子。结果：HDFs可连续传代培养15代以上，10代以下的HDFs增殖迅速，而MEFs自第4代起，增殖能力就明显下降；hESCs在HDFs饲养层上可传代培养12代以上，克隆边界清晰，细胞排列紧密，碱性磷酸酶、表面标志物检测均呈阳性，表达了hESCs特异性转录因子。结论：HDFs比MEFs具有更强的增殖能力：HDFs可作为培养hESCs的饲养层细胞。
关键词：人胚胎干细胞；人皮肤成纤维细胞；饲养层细胞
中图分类号：R329.2 文献标识码：A 文章编号：1673-6273(2009)16-3001-05
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