针对小鼠早期生长反应因子-1发夹结构小干扰RNA载体的构建及其干扰效率鉴定
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蒋晶晶 刘双珍 文丹 王沙 中南大学湘雅医院眼科;
【摘要】目的:构建及筛选高效率针对早期生长反应基因-1(Egr-1)进行RNA干扰(RNAi)的质粒。方法:根据Egr-1基因mRNA序列,设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列,克隆到空载体pGCSIL-GFP中,构建重组质粒,同时设计构建不针对任何特异基因的质粒作为阴性对照。将shRNA表达质粒转染HEK293细胞。通过对GFP表达量的观察,荧光定量PCR及western blotting定量检测Egr-1基因的表达,鉴定shRNA表达质粒对Egr-1的干扰效率。结果:针对小鼠Egr-1基因进行RNAi的3个序列中,有1个序列的干扰效率大于70%以上。结论:成功构建了1个针对小鼠Egr-1基因的高效RNAi表达质粒。
【关键词】 早期生长反应因子- RNA干扰 质粒
【基金】湖南省自然科学基金项目(08jj3067,09JJ5033) 湖南省科技厅重点项目(08sk3101)
【分类号】R778
前言近视眼是世界上最常见的一种屈光不正疾病,近视的发生是由多种信号因子参与,视网膜主动调控,巩膜主动重塑的结果。早期生长反应基因-1(early growth response gene-1,Egr-1)作为即刻早期基因家族中的一个成员,其表达产物在外界信号刺激引起的细胞内信息传递的级联反应中
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摘要 目的：构建及筛选高效率针对早期生长反应基因-1(Egr-1)进行RNA干扰(RNAi)的质粒。方法：根据Egr-1基因mRNA序列，设计有小发夹结构的3条寡核苷酸序列，克隆到空载体pGCSIL-GFP中，构建重组质粒，同时设计构建不针对任何特异基因的质粒作为阴性对照。将shRNA表达质粒转染HEK293细胞。通过对GFP表达量的观察，荧光定量PCR及westem blotting定量检测Egr-1基因的表达，鉴定shRNA表达质粒对Egr-1的干扰效率。结果：针对小鼠Egr-l基因进行RNAi的3个序列中，有1个序列的干扰效率大于70%以上。结论：成功构建了1个针对小鼠Egr-1基因的高效RNAi表达质粒。
关键词：早期生长反应因子-1；RNA干扰；质粒
中图分类号：R399.14，R778文献标识码：A文章编号：1673—6273(2009)24—4621—04
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