Rhox5基因真核表达质粒的构建及其在NIH3T3细胞中的稳定表达
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郭芬 李月琴 李实骞 罗志文 张欣 周天鸿 广东药学院生命科学与生物制药学院;暨南大学生命科学技术学院;
【摘要】目的:构建同源异性框基因Rhox5的真核表达质粒,转染NIH3T3细胞,建立稳定过表达Rhox5的细胞系。方法:PCR方法扩增Rhox5的全长cDNA序列,PCR产物双酶切后和人工合成的HA抗原表位标签共同克隆至pcDNA3.1(-)哺乳动物细胞表达载体中,构建pcDNA-Rhox5-HA融合表达质粒。脂质体法将经过测序成功的pcDNA-Rhox5-HA融合质粒和pcDNA3.1空载体分别转染NIH3T3细胞,潮霉素B筛选后建立阴性对照pcDNA3.1 in NIH3T3和稳定过表达Rhox5的Rhox5-HA in NIH3T3细胞系。RT-PCR和western blotting方法检测Rhox5-HA在稳定转染细胞系中的表达情况。结果:成功构建了pcDNA-Rhox5-Myc重组质粒,获得稳定过表达Rhox5的NIH3T3细胞系。RT-PCR和Western blotting结果表明,构建的稳定细胞系中成功表达Rhox5-HA融合蛋白。结论:Rhox5基因真核表达质粒的构建及其在NIH3T3细胞中的稳定表达为进一步体外研究Rhox5蛋白单独的功能及其与其他分子间功能性相互作用奠定了实验基础。
【关键词】 Rhox 真核表达质粒 稳定转染细胞
【基金】教育部高等学校博士学科点专项科研基金(No20060559006) 广东省自然科学基金(No8151063201000013)
【分类号】Q78
前言Rhox基因家族是一簇新发现的同源异型框基因簇,其定位于X染色体上,特异性地在生殖组织中表达,因此被命名为:Reproductive homeobox on X chromosome genes(Rhox)。Rhox基因簇包含12个同源异型框基因,均位于小鼠X染色体A2区大约0.7Mb的区段,暗示该基因簇可能编码一系列调
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前言
Rhox基因家族是一簇新发现的同源异型框基因簇，其定位于X染色体上，特异性地在生殖组织中表达，因此被命名为：Rcproductivc homeobox 0n X chromosome genes(RhoX)。Rhox基因簇包含12个同源异型框基因，均位于小鼠X染色体A2区大约0.7 Mb的区段，暗示该基因簇可能编码一系列调控生殖系统发育相关的蛋白。Rhox5，又称mPem，隶属于Rhox基因簇B亚簇。Rhox5最早由Wilkinson等在鼠的T-淋巴瘤细胞cDNA文库中获得，因该基因在胎盘(Placenta)和胚胎(Embryo)中呈时间特异性(Stagespecific)表达，故命名为Pem。
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