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编号:11899984
靶向性甲基化酶真核表达载体pcDNA3.1-myc-3a的构建
http://www.100md.com 2010年2月1日 吴 琳 张治国 张 健
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    参见附件(1989KB,3页)。

    吴琳 张治国 张健 刘新平 李福洋 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室;第四军医大学预防医学系流行病学教研室;

    【摘要】目的:在pcDNA3.1真核表达载体中构建表达融合myc-6his标签的靶向性甲基化酶pcDNA3.1-myc-3a并进行鉴定。方法:以含有myc全长基因的pcDNA3.1-myc-Luc质粒为模板,通过PCR方法扩增获得myc(DBD),再以含有靶向性甲基化酶的pcDNA4.0-GBD-3a-myc-6his质粒为模板,通过PCR的方法扩增获得融合有myc-6his标签序列的目的区段3a,然后将两者克隆入表达载体pcDNA3.1;以双酶切和PCR方法对构建的载体进行鉴定。结果:通过PCR方法获得了靶向性甲基化载体pcDNA3.1-myc-3a,并通过免疫印记方法验证了抗myc标签抗体可以特异性识别目的蛋白。结论:正确构建了靶向性甲基化酶pcDNA3.1-myc-3a的真核表达载体。

    【关键词】 DNA甲基化酶 靶向性

    【基金】国家自然科学基金资助项目(30670453)

    【分类号】Q78

    前言据推测人类约有2.8万个基因,而这些基因的表达时刻处于其上游转录因子严密的调控之中。转录因子主要通过控制其靶基因的表达实现对细胞生命活动的调控,其调控机制和功能研究也始终是生命科学的研究热点。DNA甲基化作为表观遗传学的重要研究内容日益受到重视,在高等生物的
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     前言

    据推测人类约有2.8万个基因,而这些基因的表达时刻处于其上游转录因子严密的调控之中。转录因子主要通过控制其靶基因的表达实现对细胞生命活动的调控,其调控机制和功能研究也始终是生命科学的研究热点。DNA甲基化作为表观遗传学的重要研究内容日益受到重视,在高等生物的发育、基因表达模式的维持以及基因组的稳定性中都发挥着十分关键的作用。另外,自从1978年Bishop等发现了逆转录病毒v-Myc的同源基因Myc后,研究人员对其进行了一系列的深入研究。研究表明Myc的表达在正常细胞受到严格的调控,同时,Myc也是重要的转录因子,它通过调控其下游靶基因的表达实现对细胞增殖分化的调控。因此,我们利用DNA甲基化可以导致基因沉默的原理,建立靶向性甲基化酶pcDNA3.1一mye-3a的真核表达载体,为下游靶基因筛选技术平台,及完善其调控信号网络、发现新的功能基因奠定了基础。

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