孤雌胚胎干细胞基因印迹及x染色体失活状态初步研究
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刘维强 骆玉梅 李少英 郑育红 孔舒 黄盛昌 银益飞 蒋永华 孙筱放 广州医学院第三附属医院;广州市生殖与遗传重点实验室;
【摘要】目的:研究孤雌胚胎干细胞(phESC)与受精卵来源胚胎干细胞(hESC)在印迹基因表达、X染色体失活等方面的异同。方法:运用实时荧光相对定量PCR、甲基化特异性PCR和免疫荧光染色等方法检测phESC与hESC在父系印迹基因IGF2R,母系印迹基因SNRPN,IGF2相对表达量及X染色体失活状态。结果:①母系印迹基因SNRPN,IGF2在phESC细胞中不表达,而父系印迹基因IGF2R表达量则相对于hESC有近2倍的上调;②XIST基因在第35代phESC细胞中没有表达,意味着早期的phESC没有进行X染色体失活,而到了第55代,XIST基因开始表达并随着分化时间的延长表达量逐渐上调;③XIST启动子甲基化状态及组蛋白H3赖氨酸27三甲基化免疫荧光染色阳性证实phESC在长期培养后启动了X染色体失活。结论:phESC的X染色体失活状态在培养过程中存在不稳定的情况,建议对phESC进行更深入的表观遗传稳定性研究,以确保这种细胞未来安全、高效的应用。
【关键词】 孤雌 印迹 X染色体失活 稳定性
【基金】国家自然基金项目(项目编号:30871378)
【分类号】Q813
前言孤雌胚胎干细胞具有和受精卵来源胚胎干细胞相同的无限增殖能力及三胚层分化潜能,且其MHC等位基因多是纯合子,免疫源性低,可极大减少移植后产生的免疫排斥反应,在再生医学及干细胞治疗上有巨大的应用前景。然而,由于缺少父系基因,这种细胞的表观遗传性状还不很明确。近年
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前言
孤雌胚胎干细胞具有和受精卵来源胚胎干细胞相同的无限增殖能力及三胚层分化潜能，且其MHC等位基因多是纯合子，免疫源性低，可极大减少移植后产生的免疫排斥反应，在再生医学及干细胞治疗上有巨大的应用前景。然而，由于缺少父系基因，这种细胞的表观遗传性状还不很明确。近年来，人类孤雌胚胎干细胞(hpESC)成功建系，对此类细胞的相关研究着重于干细胞特性及分化能力等方面。有报道显示，小鼠孤雌细胞的印迹基因表达存在紊乱的现象，但对hpESC的印迹、x失活等却不甚了解。因此，本研究中我们通过相对定量PCR、DNA甲基化PCR、免疫荧光染色等方法对本实验室建立的一株hpESC的印迹基因、x染色失活状态等进行研究，探讨hpESC与正常hESC间的异同。
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